【实验目的】
1. 学习紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。
2. 掌握紫外分光光度计的操作方法。
【实验原理】
大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）残基，使蛋白质在280nm的紫外光区产生最大吸收，并且这一波长范围内的吸收值与蛋白质浓度的成正比，利用这一特性可定量测定蛋白质的含量。
紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的制备中广泛应用。
【实验材料】
1.实验器材
试管及试管架；50毫升容量瓶 2只；移液管；紫外分光光度计。
2.实验试剂
(1)标准蛋白质溶液：精确配制2mg／ml的酪蛋白溶液。
(2)样品溶液：配制约0.5mg/ml的酪蛋白溶液作为未知样品溶液。
【实验操作】
1. 绘制标准曲线
取7支试管按下列各表加入各试剂：
|
试剂 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
标准蛋白质溶液(ml) |
0.0 |
0.5 |
1.0 |
1.5 |
2.0 |
2.5 |
3.0 |
|
蒸馏水(ml) |
8.0 |
7.5 |
7.0 |
6.5 |
6.0 |
5.5 |
5.0 |
|
蛋白质浓度(mg/ml) |
0.000 |
0.125 |
0.250 |
0.375 |
0.500 |
0.625 |
0.750 |
2. 测定未知样品
取样品溶液4毫升,加蒸馏水4ml混匀，在280nm下测定其光密度值。
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品溶液的蛋白质含量。
