BSL—3应用于临床、诊断、教学、研究、或者生产设施，在该级别中开展有关内源性和外源性病源的工作，若因暴露而吸入该病源。会引发严重的、可能致死的疾病。实验人员应在处理致病性的和可能使人致死的病源方面受过专业训练，并由对该病源工作有经验的、有资格的科学工作者监督。
所有与传染源操作有关的步骤，都在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行，或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。 
然而，应该认识到现有有些设施，不一定满足BSL-3的所有要求(即，双门进入工作区和密封问题)。在这种情况下，在BSL—2设施中开展常规操作(如，诊断程序中用于鉴定；分型、敏感性测试的病源繁殖)，其安全级别也可接受，但还需做到1)将实验室内废气排出室外；2)实验室的通风经过平衡以向室内提供定向气流；3)工作时，禁止进入实验室；4)严格遵照或使用BSL—3中推荐的标准微生物操作、特殊操作和安全设备。只有实验室主任可作出对BSL—3推荐的修订方法进行补充的决定。

以下的标准和特殊安全操作、设备及设施和BSL—3病源有关：
一、标准微生物操作
1、实验时，由实验室主任决定限制或禁止进入实验室。
2、接触传染源的人员在离开实验室取下手套后，要洗手。
3、实验室内严禁饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。实验室内戴隐型眼镜的人，也要戴眼镜和面罩。食品要存放在工作区外专用的橱柜和冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。
7、至少每天一次、或有活体洒出时，对工作台面进行消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。来自BSL—3实验室的传染性废物转移至他处释放前应消毒。
9、实施控制昆虫和龋齿动物的程序(参见附录G)(另发)。

二、特殊操作
1、实验时，关闭实验室的门。
2、实验室主任对进入实验室进行控制，限制项目有关人员及辅助人员进入。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。实验室主任对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。未成年人不得进入实验室。
3、实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)、遵守进出程序的人，才能进入实验室和动物房。
4、当实验室或遏制设施中有传染源和感染动物时，所有实验室和动物房入口处，应贴有危险警告标志和常用的生物危险符号，并显示以下信息：有关病源、实验室主任和有关责任人的姓名和电话表、进入实验室的特别要求(如，必须免疫、戴口罩、或采取其他的个人防护措施)。
5、实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)，并建议根据所处理的病源定期进行皮试。
6、适当时，收集和储存适合于所有实验室人员和其他有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或实验室的功能，应定期收集其他血清样品。
7、实验室主任应制定实验室专用生物安全手册，标准操作程序中要包括生物安全预防措施。要告知实验人员特殊风险，实验人员要阅读，并在操作和程序中遵照执行。
8、实验人员及其辅助人员应接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。

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