1、背位（仰卧位）固定法 将动物的背部直接接触手术台的固定方法。在呼吸、循环、消化及泌尿等实验中均采用此法。各类哺乳动物的背位固定法大同小异，现以兔为代表加以说明。
头部的固定：头部的固定通常使用头部固定夹（图），使用时可将相应的头夹固定于手术台前段的直棒上，然后将以麻醉的动物背位置于手术台上，兔头的固定是将兔头夹的半圆铁圈由背部夹持于动物的颈部，然后将金属圆铁圈适度地套紧兔嘴，旋紧螺丝，加以固定（图），但不可过分压迫鼻部，以免影响呼吸。
四肢的固定：在头部固定之后，即可固定四肢，四肢用绑带固定。先将绑带按图打活结，再套进动物前肢的腕关节和后肢的裸关节，将绑带收紧，后肢的绑带可直接拉紧分别扎于手术台两侧的木孔上。除特殊要求外，前肢的固定方法应为：将两前肢平放在胸部的两侧，再把捆绑前肢的两条绑带从动物背部交叉穿过，并压在对侧前肢的前臂上，最后拉紧绑带，固定于手术台两侧的木孔上。这样既将动物稳妥的固定于手术台上。
2、腹位（俯卧位）固定法 腹位固定是动物的腹部直接接触手术台的固定方法。这种固定法适用进行脑、脊髓的实验。兔头部的固定用马蹄形头固定器。其方法是在两侧眼眶下部剪去一小块毛皮，暴露颧骨突，用带1mm钻头的骨钻打一个孔，将固定器两侧的尖头金属棒紧紧嵌入小孔内，加以固定，再调节固定器中间的金属棒高度，使其嵌尖端紧嵌在两门齿缝之间，旋紧螺旋固定之。如果需要头部上仰，可提高固定器前段的垂直铁柱；如需头部下俯，可将该铁柱放低。
动物四肢的固定同前，用绑带缚紧后直接拉紧固定于手术台两侧的木孔上（或直接用手术台两侧的四肢固定夹夹住），前肢的绑带可不进行交叉。
3、蛙类固定法 蛙和蟾蜍的固定法也分背部和腹部两种。规范的固定方法是使用蛙腿针和蛙板，方法较简单。也可用大头针将四肢直接固定在木板上。蛙类头部活动不大，一般不作特殊固定。由于双毁髓蛙类周身瘫软，无须固定。
四、手术基本操作技术
1、剪毛：在哺乳动物体上进行皮肤切口之前，须将切口部位及其周围的毛剪去。剪毛应使用剪毛剪，持剪方法同一般手术剪。剪毛时，应将剪毛剪的凸面贴近皮肤，依次剪毛，切忌提起毛皮剪毛，以免剪及皮肤。剪下的毛应放入污物缸内，以免兔毛到处飞扬，污染环境（可用沾湿的卫生纸擦去浮毛）。
2、手术切口与止血：作切口前，应注意切口的大小和解剖结构，一般以少切断神经和血管为原则，同时应尽可能使切口与各层组织的纤维方向一致。切口的大小，既要便于手术操作，但又不可过大。做切口时，先用左手拇指和食指、中指将预定切口上端两侧的皮肤固定，右手持手术刀，用持弓式或持笔式，以适当的力量，一次全线切开皮肤和皮下组织，直至肌层。手术过程中要随时注意止血，以免造成手术野血肉模糊，难以分辨血管和神经，延误手术时间。止血方法视出血情况而定，微小血管出血时，要用湿热生理盐水纱布按压止血；较大血管出血时，须先找到出血点，用止血钳夹住，而后用线结扎；大血管破损，应准确、快速止血，否则失血过多，影响实验。实验期间，应将创口暂时闭合，或用温热生理盐水纱布盖好，以免组织干燥。
3、手术打结：手术结不仅是外科手术上的重要技术，也是急性动物实验中的基本技术。手术结有多种，如单结、方结、外科结、脱结、十字结及三叠结等。其中以方结和三叠结最为安全可靠，在生理学实验中，又以方结最为常用，打结的方法有单手打结法、双手打结法和持钳打结法几种。单手打结法最为方便，但结线必须留得长些。持钳打结法，适用于结线太短或结扎部位过于深等情况。总之，打结是一种基本技术，在动物实验中经常使用，要经常练习，熟悉掌握。
4、血管、神经分离术（颈部、腹部）
颈外静脉分离术：哺乳动物的颈外静脉壁薄粗大，且分布很浅。位于颈部皮下、胸骨乳突肌外缘。分离该静脉时，可用左手拇指与食指捏住切口一侧的皮肤，再向外翻，可将暗紫色的粗大静脉翻于食指上。用玻璃分针或细止血钳由静脉外侧分离结缔组织，即可将颈外静脉分离出来，然后穿线备用。
颈总动脉分离术：颈总动脉位于气管外侧，腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲状肌所覆盖。可用左手拇指和食指捏住已分离的气管一侧的胸骨肌，再稍向外翻，即可将颈总动脉以及神经束翻于食指上，用玻璃分针或止血钳轻轻分离动脉外侧的结缔组织，便可将颈总动脉分离出来，最后穿线备用。注意：颈部神经与颈总动脉被结缔组织包绕在一起，形成血管神经束，在分离动脉时，应注意神经的部位与走行，沿着动脉分布走向用玻璃分针平行分离，切勿伤及与其伴行的神经。
神经分离术：同颈总动脉分离术。先暴露出血管神经束，然后用玻璃分针小心分离其外的结缔组织膜即可看到与颈总动脉伴行、粗细不同的神经。如仍不能分辨神经类别，可在分离长约0.5cm颈总动脉的基础上，轻轻提起动脉，透过灯光，则可清楚地看到随动脉被拉开的结缔组织鞘膜中的各类神经。颈部的神经分布因动物的种类而不同，兔颈部的血管神经束内有3条粗细不同的神经，其中迷走神经最粗，呈白色，一般位于外侧；交感神经稍细，略呈灰色，一般位于内侧，主动脉神经最细，一般位于迷走神经与交感神经之间（由于主动脉最细，极易拉断，需要分离时应先予分离）。分离神经时需用尖端细而圆滑的玻璃分针，轻轻沿神经平行走向小心分开结缔组织鞘膜，将神经分离出2cm即可穿线备用。
5、腹部手术：在动物实验中，腹白线是腹部切口的常用部位。腹白线是位于腹中线下面的白色腱膜线，从胸骨的剑突隆起直至耻骨联合。腹白线为较宽的结缔组织间层，神经血管分布极少。因此，通过腹白线所作的腹正中切口，不伤及肌肉、神经和血管，对动物损伤较小，较少出血。腹正中切口的长度因实验的要求和动物的种类不同。如在观察兔胃和小肠运动的实验中，需在胸骨剑突下方作8—10cm的切口，才能充分暴露胃和小肠。而在兔尿生成的调节实验中，只需自耻骨联合向前作2—3cm的切口，即可将膀胱引出。
6、采血技术 由于实验动物不同，实验需要和采血数量有别，所选用的采血方法也不同。这里介绍几种实验动物的常用采血技术。
（1）兔耳中央动脉采血法：将兔置于兔固定箱内，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳中央有一条纵形、较粗、颜色鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央动脉的末端，沿动脉平行地沿向心方向刺入动脉，轻轻抽动针筒，即可看见血液进入注射器。一次可采血约15ml（采血后应注意止血）。采血一般使用6号针头，不可太细。需加注意的是，兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此采血前必须使兔耳充血。当动脉扩张，未发生痉挛性收缩前立即进行抽血，时间过长，动脉会发生较长时间的收缩，采血难以进行。
