2．煮沸裂解
（1）将细菌沉淀[收获细菌的步骤同碱裂解法1-3步]重悬于350μl STET中。
（2）加25μl新配制的溶菌酶溶液，振荡混匀。（3） 将离心管放人煮沸的水浴中，时间恰为40秒。
（4）用微量离心机于室温以12000rpm离心10分钟。
（5）转移上清于一新管中或用无菌牙签从微量离心管中去除细菌碎片。
（6）在上清中加入40μl 5mo1／L乙酸钠(pH5.2)和420μl异丙醇，振荡混匀，于室温放置5分钟。
（7）用微量离心机于4℃以12000rpm离心5分钟，回收核酸沉淀。 ．
（8）小心吸去上清液，加入70%冷乙醇洗沉淀1-2次。
（9）真空干燥DNA沉淀后，将沉淀溶于TE溶液中。 3．琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定、纯化DNA片段的标准方法，该技术操作简便，可以分辨不同分子量大小、不同构型的DNA分子。此外，直接用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙锭进行染色，在紫外灯下即可确定DNA在凝胶中的位置。
2．琼脂糖凝胶的制备
①用胶带将洗净、干燥的玻璃板的边缘(或电泳装置所配备的塑料盘的开口)封住，形成一个胶膜。将胶膜放在工作台的水平位置上。
②配制足够用于灌满电泳槽和制备凝胶所需的电泳缓冲液(通常是1×TAE或0.5×TBE)。
③配制一定浓度的凝胶。在电泳缓冲液中加入琼脂糖，在沸水浴或微波炉中将悬浮液加热至琼脂糖溶解。
④ 使溶液冷却至60℃。需要时加入溴化乙锭，充分混匀。
小心：溴化乙锭是一种强烈的诱变剂并有中度毒性。使用含有该染料的溶液时必须戴手套。使用完后应该进行净化处理。通常用水配制成10mg／m1的贮存液在室温下避光储存，使用终浓度为0.5μg／ml。
⑤吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5-1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底将有破裂的危险，破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏。
⑥将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，凝胶的厚度在3-5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。
⑦在凝胶完全凝固后，小心移去梳子和胶带，将凝胶放入电泳槽中。
⑧在电泳槽中加入末过胶面1mm以上的足够的电泳缓冲液。
2．点样
①DNA样品与加样缓冲液混合后，用微量取液器一次加入样品槽中。
②加完所有样品后，盖上电泳槽盖并通电，使DNA向阳极移动。采用一定电压（按照两极间距离计算），几分钟后，溴酚蓝从加样孔中移出。继续电泳，直至溴酚蓝在凝胶中迁移出适当的距离。
③切断电流，打开槽盖，在紫外灯下检查凝胶。
