10）将8）准备的样品3000g离心，微量移液器去除醋酸锂，加入转化混合物。基本“转化混合液”由下列成分组成，小心按下列顺序加入：
240 μl PEG（50％w/v）（加入后用枪头上下吹打，尽量将菌体悬浮）
36 μl 1.0mol/L（10×）醋酸锂
25 μl 单链担体DNA（2.0mg/mL）
50 μl 水和质粒DNA（0.1-10μg）（一般情况下，质粒加入10-40μl即可）
注：按顺序加入是很重要的。应考虑最先加入PEG可保护细胞免受高浓度醋酸锂的不利影响。
11）剧烈振荡每个反应管直到细胞完全混匀，通常需要1min左右。
12）30℃保温30min
13) 42℃水浴中热激20-25min。
注：最适热激时间随不同酵母而异。如果你需要获得高转化频率，需事先测试最佳时间。
14）以5000g离心1-2min，用微量移液器除去转化混合液。
15）吸0.2-1.0mL无菌水加到每个反应管中，用移液器上下轻轻抽提以悬浮沉淀。
注：如果想获得高转化频率，这一步尽可能温和操作。
16）用等份的100-200ul转化混合液涂布倒有省却（drop-out）培养基的选择平板。28-30℃培养2-4天，观察并记录结果。这里用未转化的酵母突变体做对照。
3． 转化子的功能验证
分别将转化子接种到含有微量铁和含有BPDS 或FERROZINE（铁螯合剂）的CM固体培养基上，进行功能验证，并筛选出转化的阳性克隆。平板划线如图4-3所示
六、结果与分析
分别记录转化子筛选、转化子在选择培养基上生长的结果，解释图4-4 的实验结果。
图4-4 Fdr3作为一种铁的转运蛋白互补酵母M3突变体的结果
七、思考题
1． 试述异源互补法的原理及其在分子细胞生物学中的应用。
2． 酵母突变株在省却相应营养成分的培养基中能否生长？为什么？
附 酵母遗传学命名法
用于酵母遗传学早期介绍的命名法及其规则已由Sherman和Lawrence（1974）以及Sherman（1981）作了概述。基因符号应尽量与Demerec等（1966）提出的标准相一致，即用三个斜体字母命名（例如：arg）。与Demerec等（1966）提出的标准相反，遗传学基因座通过跟在基因符号后的一个数字（而不是字母）来表示，如：arg2。显性等位基因通过使用基因符号的三个斜体大写字母来表示，如ARG2。左下角小写字母则代表隐性等位基因，如营养缺陷型arg2。野生型基因用一个右上角带＋的符号表示，如sup6+或ARG2+。用一个连字符号将一个数字与一个基因座标记隔开的方式表示该座位上的等位基因，如：arg2-14。座位序号应与原来的标记一致，但等位基因的序号可因不同实验室而异。
表型的名称通常用右上角带有＋或－的罗马字的相应基因标记表示，如用Arg+和Arg-分别表示精氨酸非依赖型和精氨酸依赖型。
下面的例子说明了用于酿酒酵母遗传学命名的规则：
ARG2 一个基因座或显性等位基因
arg2 一个产生依赖精氨酸作为表型的基因座或隐性等位基因
ARG2+ 该基因的野生型等位基因
arg2-9 一个特异等位基因或在ARG2基因座突变
Arg+ 一个不依赖精氨酸的菌株
Arg- 一个不赖精氨酸的菌株
Arg2p 表示ARG2基因的蛋白质产物
除了这些普遍的规则外，还存在一些特殊规则。基因簇、同一基因内的互补群或一个基因中具有不同特性的区域可以用带有大写字母的相应基因座标记表示，如：his4A、his4B。
随着酵母重组DNA技术的广泛应用，出现了一种适合于基因插入、基因融合和质粒命名的方法：
ARG2∷LEU2 LEU2基因插入ARG2基因座，但插入的位置没有破坏ARG2的功能
arg2∷LEU2 LEU2基因插入ARG2基因座，但插入的位置破坏了ARG2的功能
arg2-101∷LEU2 LEU2基因插入ARG2基因座，插入的位置破坏了ARG2的功能且标明了被破坏等位基因的位置
cyc-arg2 CYC1和ARG2基因发生融合，融合后的两个基因都是无功能的
Pcyc1-ARG2 CYC1基因启动子和ARG2基因的融合体，融合后的ARG2基因是有功能的
[Ycp-ARG2] 携带一个有功能ARG2基因座的着丝粒质粒
[pCK101] 表示一个具体的质粒，其结构可查资料
尽管应尽量避免使用上标，但有时为了方便也会使用右上标R或S来区分抗性或敏感基因。例如：控制刀豆氨酸盐抗性（can1）和硫酸铜抗性（CUP1）的基因及其敏感等位基因可分别用canR1、CUPR1、CANS1和cupS1表示。
