四、材料、试剂和仪器
1． 材料
DDY4酵母突变株（fet3-2::HIS3/fet3-2::HIS3，
fet4-1::LEU2/fet4-1::LEU2，
ade2/+ura3/ura3 trp1/trp1 leu2/leu2 his3/his3 can1/can1）、
DEY1453酵母突变株（fet3-2::HIS3/fet3-2::HIS3，fet4-1::LEU2/fet4-1::LEU2，ade2/+ura3/ura3 trp1/trp1 leu2/lue2 his3/his3 can1/can1)，
酵母质粒载体pDB-Leu，插入IRT的酵母重组质粒pDB-Leu-IRT。
2． 试剂
1) 酵母转化系统试剂盒（Clontech公司，Cat No.630439）
内含物：担（载）体DNA（10μg/mL）
醋酸锂
TE缓冲液
PEG 50%
对照DNA
2) 铁离子螯合剂
BPDS：Bathophenanthrolinedisulfonic acid disodium salt （SIGMA公司，产品编号：B1375）
FERROZINE：3-（2-Pyridyl）-5,
6-diphenyl-1,2,4-triazine-4′,
4〞-disulfonic acid sodium salt （SIGMA公司 产品编号为 P9762）
3) 自备试剂（可代替试剂盒）
1.0 mol/L醋酸锂（LiAc）
100 mmol/L醋酸锂（LiAc）
无菌ddH2O
50％w/v PEG4000或PEG3350
10X TE缓冲液（用于溶解担体DNA，使用前稀释）: 100mmol/L Tris－HCl（pH8.0），10mmol/L 乙二胺四乙酸 （EDTA）
4）培养基
（1）YPAD液体培养基见实验32
（2）完全极限（CM）省却成分培养基（complete minimal dropout medium，100mL）
酵母基本氮源（yeast nitrogen base,YNB,无氨基酸或硫酸铵） 0.67g
葡萄糖(Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌，4℃保存) 2g
硫酸亚铁铵（Fe(NH4)2(SO4)2,单独灭菌，后加入） 0.01μmol/L(终浓度)
省却营养物的氨基酸等混合物（以母液形式配好）见下表
琼脂（Bacto-agar） 2g
酵母基本氮源和琼脂加ddH2O至80mL，调pH值至5.8，定容至84mL，高温灭菌。待温度降至55℃时，加入10mL无菌的10× dropout solution（Leu-）、5mL预热的无菌40％葡萄糖贮液，1mL Fe(NH4)2(SO4)2。
表4-1 10× dropout solution（100mL）
| 营养物 | 10×含量 （100 mL） |
1×终浓度 |
| 腺嘌呤（半硫酸盐）Adenine hemisulfate salt(SIGMA A3159) |
0.02g |
200mg/L |
| L-缬氨酸L-Valine |
0.15g | 1500mg/L |
| L-异亮氨酸L -Isoleucine |
0.03g | 300mg/L |
| L-精氨酸（盐酸盐）L-Arginine HCL |
0.02g | 200mg/L |
| L-组氨酸（一水合盐酸盐）L-Histidine HCL Monohydrate |
0.02g | 200mg/L |
| L-亮氨酸L-Leucine | 0(不加) | 0(不加) |
| L-赖氨酸L-Lysine HCL | 0.03g | 300mg/L |
| L-甲硫氨酸L-Methionine | 0.02g | 200mg/L |
| L-苯丙氨酸L-Phenylanine | 0.05g | 500mg/L |
| L-苏氨酸L-Threonine | 0.2g | 2000mg/L |
| L-色氨酸L-Tryptophan | 0.02g | 200mg/L |
| L-酪氨酸L-Tyrosine | 0.03g | 300mg/L |
| L-天冬氨酸L-Aspartic acid | 0.01g | 100mg/L |
| L-丝氨酸L-Serine | 0.04g | 400mg/L |
| L-谷氨酸L-Glutamin acid | 0.01g | 100mg/L |
| 尿嘧啶Uracil | 0.01g | 200 mg/L |
