(2) YEA培养基（100mL）
　　YEA配方中含有150mg/L的腺嘌呤。用于培养尿嘧啶缺陷株的培养基，应加入150mg/L的尿嘧啶以利于最佳生长。

3． 仪器
　　恒温培养箱，恒温摇床，相差/微分干涉显微镜，普通光学显微镜

四、实验程序
　　1．酵母菌的摇培 无菌条件下，用接种环或微量取样器将酵母菌菌种接种于YPD液体培养基和非洲粟酒裂殖酵母的培养基，28-30℃,200rpm恒温摇床摇培过夜。
　　2．制片、压片，明视野显微观察。
　　3．相差显微镜的使用与标本观察。
　　4．液体培养基中细胞滴度的检测
　　5．分光光度测定法
　　　　1）YPAD过夜培养物用水稀释100倍。
　　　　2）用分光光度计测定600nm处的光密度。
　　　　3）记住稀释倍数，计算原始培养物的细胞数。
　　　　例如：在YPAD中100倍稀释的培养物的OD600为0.21，可按下式计算：
　　　　0.21（OD600）×100（稀释倍数）×1×10⁶（个细胞/mL）/0.1（OD600）=2.1×10⁸个细胞/mL
　　　　对于OD600和细胞滴度之间的对应关系应分别测定，可通过将特定OD600的培养物稀释后涂板检测每毫升的活细胞数。
　　6．血细胞计数器计数法
　　　1）YPAD过夜培养物用水稀释10倍。
　　　2）将细胞悬液小心地加在盖片和血细胞计数器之间。10×物镜和10×目镜观察，相差显微镜观察效果更好。让细胞在血细胞计数器的网格中停留几分钟。网格区为1mm2，分成25个相同大小的方格，其容积为10-4mL。
　　　3）计数5个对角方格中的细胞数量，乘以5即是整个网格区细胞的总数。
　　　4）计算细胞滴度：计数的细胞数×5×稀释倍数×1/血细胞计数器25个方格的容积。
　　　例如：5个对角方格中计数的细胞为239个，其滴度计算应是：
　　　239个细胞×5×10（稀释倍数）×1/10-4mL=1.2×10⁸个细胞/mL

五、 结果与分析
　　

六 、思考题
　　1． 试从培养条件、取材等方面比较酵母细胞的芽殖和裂殖细胞培养的异同。
　　2． 如何利用相差显微镜的光学原理观察活的细胞？

上一页  [1] [2]