一、目的和要求
1．了解革兰氏染色法原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
2．掌握革兰氏染色的基本步骤。

二、原理
G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，CW通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在CW内而不易脱色，因此呈蓝紫色。G-的CW中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，CW的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。

三、 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
染液：革兰氏染液

四、操作

具体步骤
制片——固定——初染（结晶紫染液）1-2min——水洗——媒染（碘液）1min——水洗——脱色（95%乙醇至无色——水洗——复染（番红或复红染液）1-2min——水洗——干燥——镜检
革兰氏染色的关键环节
涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。
乙醇脱色时间
菌龄：应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变了细菌CW的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。
火焰固定不宜过热
媒染剂的作用
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或吸附力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使之不易脱落。

五、实验报告
简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。

六、预习
细菌的芽孢染色法