谷物种子萌发时淀粉酶活力测定--生物秀

谷物种子萌发时淀粉酶活力测定

作者：未知来源：本站原创时间：2005-12-6

【方法】

1.酶液提取：称取25℃下萌发3～4天的小麦种子1.0g（芽长1.0~1.5cm），置研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆后转入离心管中，用7ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。

然后在3000rpm转速下离心10min，将上清液倒入50ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液5ml，放入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀分酶稀释液。

2.麦芽糖标准曲线制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表33-1加入试剂。

表33-1 制作麦芽糖标准曲线配方表

摇匀，置沸水中浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

3.酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管,编号,按表33-2进行操作。

表33-2 配活力的测定配方表

摇匀，置沸水浴中5min，取出后冷却，加蒸馏水至20ml。摇匀，在540nm波长下比色，记录测定结果。

4.结果计算：用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg），再按下式计算α-淀粉酶的活力（A_α），淀粉酶活性以麦芽糖mg·g^﹣1·min^﹣1表示：

A_α=

Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg），按下式计算（α+β）-淀粉酶总活力A_T：

A_T＝

式中 A—淀粉酶活性，A_α为α-淀粉酶的活性，A_T为淀粉酶总活性，主要是α、β淀粉酶的活性；

C_α—α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量（查标准曲线求值，以下同）；

C_T—（α+β）淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量；

V₁—显色所用酶液体积（ml）；

t—酶作用时间（min）；

V_t—样液稀液总体积（α-淀粉酶为50ml,α+β淀粉酶为500ml）；

FW—样品鲜重（g）。

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