3.样品的纯化（1）将乙酸乙酯溶液用旋转蒸发器浓缩至干。用2ml100％甲醇溶解残留物。（2）点样：取100μl甲醇溶液点在涂有硅胶GF254玻板下端1cm处（或点在华特曼3号层析纸上），并在同一水平上分别点上标准GA和ABA溶液100μl。（3）展层：用异丙醇-28％氨水-水（10∶1∶1，V／V／V）作为展层剂展层。前沿至玻板顶端0.5cm处即停止展层。（4）定位：层析完毕后，吹干玻板并在紫外灯下观察色带，与标准ABA和GARf值相同或相近的色带，就作为纯化后的ABA和GA。（5）洗脱：将ABA和GA带分别括下（或剪下），用95％乙醇浸提3次。溶液经减压蒸干后，即可进一步作生物学测定或气相色谱测定之用。
（二）ABA和GA的测定
1.ABA的生物学鉴定
（1）材料培养：精选小麦种子，25℃黑暗下浸种2h，排于培养皿湿滤纸上，在25℃下发芽。待胚根出现后，移入培养缸中的塑料网上，继续在25℃暗中培养。约72h后，选取胚芽鞘2.8～3.0cm的幼苗，用刀片自顶端分别切成3mm，5mm，5mm三小段，取中间5mm切段置蒸馏水中2～3h，备用。（2）ABA母液（200μg/ml）的配制：称取20mgABA，溶于少量酒精，以无离子水定容至100ml。（3）标准溶液的配制：吸取5ml母液，加无离子水定容至100ml，即为10μg/ml。吸取5ml10μg/mlABA溶液，用2％蔗糖-0.01mol/L磷酸缓冲液（pH5.0）定容至50ml，即为1μg/mlABA标准液。余此类推，分别配成0、0.001、0.01、0.1、1μg/ml标准液。（4）标准曲线的绘制：取2ml各种浓度的ABA标准液分别置入10ml具塞试管，每管加入小麦芽鞘切段10根。各浓度均需3～4个重复。加塞后，置暗处25℃摇床上振荡20h。将10个切段取出测定其总长度（cm），然后按下列公式计算处理后减少的百分数（R）：R（％）＝(D空-D处理)/D原×100。
式中：D空：空白总长度；D处理：处理总长度；D原：原始总长度（5.0cm）。用R与ABA浓度的相关性，绘制标准曲线。（5）将待测样品溶于2ml2％蔗糖-0.01mol/L磷酸缓冲液（pH5.0），置具塞试中，按上述步骤操作，算出R值，再查标准曲线，就得到ABA浓度C，依下式计算出样品中ABA含量：ABA含量（μg/g鲜重）＝C（μg/ml×2×10-1/W（g）2.ABA的气相色谱测定将洗脱的ABA加入0.1mlBSA（N.O-二-三甲基硅烷基乙酰胺）使脱落酸硅烷化。0.5h后，吸取5μl作气相层析，层析条件：柱长2m，φ5mm（不锈钢柱）、固定相为10％SE-30，DMCS、A、W为担体，进样口温度250℃，柱温200℃，FID检测。载气流速为30μl/min，采用内标法定性，外标法定量。计算：ABA含量（μg/g鲜重）＝A1×Ws×100×1/(As×5×W)
