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细胞化学染色分类技术
作者:佚名 来源:本站原创 时间:2005-11-30


      染色技术是分类白细胞的经典依据,但瑞氏染色这类形态学复合染色不能被自动分析所模拟。一般光学技术只能测到光强等量的参数,而不能测得波长等属性的参数。因此,自动分类就要求用单染来甄别。

      过氧化氢是生物氧化还原反应的最重要氧化剂,在吞噬过程中广泛应用。因此,可以根据细胞过氧化氢酶染色来推断白细胞的吞噬功能强弱,并结合细胞的大小,从而将白细胞分为:高过氧化氢酶的嗜酸性粒细胞、次之的中性粒细胞、较弱单核细胞以及没有过氧化氢酶的淋巴细胞和嗜碱性粒细胞四类。从而达到分类的目的。由于一般嗜碱性粒细胞很少,因此没有过氧化氢酶的细胞可以近似的认为是淋巴细胞。

      方法:将血加入到含有清洗剂和甲醛的高渗液体内,其中清洗剂(含非离子活性剂)使细胞破坏,甲醛使白细胞浆内酶被固定。此后加入过氧化氢和4-氯-萘酚、加热,如果待检细胞浆中含有过氧化氢酶即可分解过氧化氢产生[O],后者可使4-氯-萘酚显色并沉积定位于酶反应部位。细胞通过测试区时,由于酶显色不同和细胞大小的差异,激光束射到细胞上前向角和散射角不同。以X轴为吸光率标记(酶反应强度),Y轴为光散射(细胞大小),每个细胞产生的两个信号,即可将白细胞分为四类。

      由于淋巴细胞和嗜碱性粒细胞没有过氧化氢酶所以不能分开,为了解决嗜碱性粒细胞的测定问题,一般采用碱性溶剂将其他白细胞溶解,用体积法测得嗜碱性粒细胞。

     

     

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