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常见食[药]用菌的3种总DNA提取方法比较研究
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-11-29


        为了进一步了解所提取到的DNA质量,我们对3种方法提取到的DNA又进行了RAPD比较,从图3中可看出大多数食(药)用菌,尽管由不同的方法提取得到DNA,RAPD结果却基本上表现较一致,一些特征条带重复性好,只是在条带丰富性上有一些差别。

        当然,也有个别例外,如白木耳在QIAGEN试剂盒法中没有得到象其它两种方法中得到的结果,食品DNA试剂盒法中的黑木耳和杏鲍菇没有得到其它两种方法中得到的结果。RAPD结果是否可以说明DNA质量,目前没有相关的报道,尤其RAPD敏感度太高,实验室间重复性差。不过,本研究中同一种食(药)用菌的不同DNA提取途径得到的DNA 的RAPD结果表现较一致,应该可以从一个侧面说明提取到的DNA质量。

    表2 15种食(药)用菌适合于PCR用的基因组DNA的3种提取方法的效果比较

    食(药)用菌
    方法
    CTAB 法
    QIAGEN试剂盒法
    食品试剂盒法
    F.a velutipes
    +
    +
    +
    P.geesteyanus.Singer
    +
    +
    +
    P.comucopiae
    +
    +
    -
    P.eryngii
    +
    +
    +
    A.cylindraca maire
    +
    +
    +
    A.bisporus
    +
    +
    +
    A.blazie
    +
    +
    +
    P.sajur-caju
    +
    +
    +
    R. vinosa Lindbe
    +
    +
    +
    V. volvacea
    +
    +
    +
    L. edodes
    +
    +
    +
    D. indusiata
    +
    +
    +
    G.lucidum
    +
    +
    +
    spore of G.lucidum
    +
    +
    +
    T.fuciformis Berk
    +
    +
    -
    A.auricula
    +
    -
    +

    “+”表示这种方法适合于该食(药)用菌的基因组DNA提取,“-” 表示不适合。

    3.3 结论与问题

        根据以上分析,我们认为可以得出如下2点结论:一、电泳方法证明3种方法均能提取到小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌的DNA,另外CTAB法还可以用于提取白木耳和秀珍菇DNA,QIAGEN试剂盒法能用于提取草菇DNA;二、除了白木耳不能用QIAGEN法以及黑木耳和杏鲍菇不能用食品DNA试剂盒法外,3种方法均能对所有其它食(药)用菌提取到适合于RAPD的DNA(见表2)。综合以上结论,结合已有的食用菌DNA提取的研究结果,我们认为可以选用CTAB法作为检测这些食(药)用菌转基因成分时的基因组提取方法,直至有更好的方法被研究出来。最后我们的问题是---由于食(药)用菌DNA的紫外吸收值不正常,电泳又不适用于所有食(药)用菌种类,如何鉴定食(药)用菌DNA质量以及如何减少DNA提取过程中其它物质如多糖等的污染还有待进一步的研究。

    参考文献:
    [1] 江玉姬,谢宝贵,陈文校.草菇DNA提取方法初探[J].福建农业学报,2000,15(2):61-64.
    [2] 王春晖,刘文彬,邓洁娇.一种提取食用菌DNA的有效方法[J].食用菌, 1999,21(1):9-10
    [3] 杨华,李联泰.食用菌DNA提取方法研究[J]. 中国食用菌, 2003,22(1):19-22.

    第一作者简介:江树勋,男(1969-),硕士,工程师,工作于福建出入境检验检疫局技术中心转基因产品及DNA检测鉴定实验室,从事基因工程产品的分子生物学检测与研究工作。

     

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