为了进一步了解所提取到的DNA质量,我们对3种方法提取到的DNA又进行了RAPD比较,从图3中可看出大多数食(药)用菌,尽管由不同的方法提取得到DNA,RAPD结果却基本上表现较一致,一些特征条带重复性好,只是在条带丰富性上有一些差别。
当然,也有个别例外,如白木耳在QIAGEN试剂盒法中没有得到象其它两种方法中得到的结果,食品DNA试剂盒法中的黑木耳和杏鲍菇没有得到其它两种方法中得到的结果。RAPD结果是否可以说明DNA质量,目前没有相关的报道,尤其RAPD敏感度太高,实验室间重复性差。不过,本研究中同一种食(药)用菌的不同DNA提取途径得到的DNA 的RAPD结果表现较一致,应该可以从一个侧面说明提取到的DNA质量。
表2 15种食(药)用菌适合于PCR用的基因组DNA的3种提取方法的效果比较
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食(药)用菌 |
方法 |
CTAB 法 |
QIAGEN试剂盒法 |
食品试剂盒法 |
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F.a velutipes |
+ |
+ |
+ | |
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P.geesteyanus.Singer |
+ |
+ |
+ | |
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P.comucopiae |
+ |
+ |
- | |
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P.eryngii |
+ |
+ |
+ | |
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A.cylindraca maire |
+ |
+ |
+ | |
|
A.bisporus |
+ |
+ |
+ | |
|
A.blazie |
+ |
+ |
+ | |
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P.sajur-caju |
+ |
+ |
+ | |
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R. vinosa Lindbe |
+ |
+ |
+ | |
|
V. volvacea |
+ |
+ |
+ | |
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L. edodes |
+ |
+ |
+ | |
|
D. indusiata |
+ |
+ |
+ | |
|
G.lucidum |
+ |
+ |
+ | |
|
spore of G.lucidum |
+ |
+ |
+ | |
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T.fuciformis Berk |
+ |
+ |
- | |
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A.auricula |
+ |
- |
+ | |
“+”表示这种方法适合于该食(药)用菌的基因组DNA提取,“-” 表示不适合。
3.3 结论与问题
根据以上分析,我们认为可以得出如下2点结论:一、电泳方法证明3种方法均能提取到小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌的DNA,另外CTAB法还可以用于提取白木耳和秀珍菇DNA,QIAGEN试剂盒法能用于提取草菇DNA;二、除了白木耳不能用QIAGEN法以及黑木耳和杏鲍菇不能用食品DNA试剂盒法外,3种方法均能对所有其它食(药)用菌提取到适合于RAPD的DNA(见表2)。综合以上结论,结合已有的食用菌DNA提取的研究结果,我们认为可以选用CTAB法作为检测这些食(药)用菌转基因成分时的基因组提取方法,直至有更好的方法被研究出来。最后我们的问题是---由于食(药)用菌DNA的紫外吸收值不正常,电泳又不适用于所有食(药)用菌种类,如何鉴定食(药)用菌DNA质量以及如何减少DNA提取过程中其它物质如多糖等的污染还有待进一步的研究。
参考文献:
[1] 江玉姬,谢宝贵,陈文校.草菇DNA提取方法初探[J].福建农业学报,2000,15(2):61-64.
[2] 王春晖,刘文彬,邓洁娇.一种提取食用菌DNA的有效方法[J].食用菌, 1999,21(1):9-10
[3] 杨华,李联泰.食用菌DNA提取方法研究[J]. 中国食用菌, 2003,22(1):19-22.
第一作者简介:江树勋,男(1969-),硕士,工程师,工作于福建出入境检验检疫局技术中心转基因产品及DNA检测鉴定实验室,从事基因工程产品的分子生物学检测与研究工作。


