2. 材料、设备及试剂

一. 材料

E. coli DH5α菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ；pBS 质粒DNA: 购买或实验室自制，eppendorf 管。

二. 设备

恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱, 恒温水浴锅, 制冰机, 分光光度计,微量移液枪。

三. 试剂

1.LB 固体和液体培养基：配方见第一章。

2.Amp 母液：配方见第一章。

3.含Amp 的LB 固体培养基:将配好的LB 固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp 储存液,使终浓度为50ug/ml,摇匀后铺板。

4.麦康凯培养基(Maconkey Agar):取52g 麦康凯琼脂,加蒸馏水1000ml,微火煮沸至完全溶解,高压灭菌，待冷至60℃左右加入Amp 储存液使终浓度为50ug/ml,然后摇匀后涂板。

5.0.05mol/L CaCl₂ 溶液:称取0.28g CaCl₂(无水,分析纯),溶于50ml 重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。

6.含15%甘油的0.05mol/L CaCl2: 称取0.28g CaCl₂(无水,分析纯),溶于50ml 重蒸水中,加入

15ml 甘油,定容至100ml,高压灭菌。

3.操作步骤

一、 受体菌的培养

从LB 平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB 液体培养基中,37℃下振荡培养12 小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50 的比例接种于100ml LB 液体培养基中,37℃振荡培养2-3 小时至OD600 ＝0.5 左右。

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