2. 采血：用5毫升灭菌注射器吸取肝素（500单位/毫升）0.05毫升湿润管壁。用碘酒和酒精消毒皮肤，自肘静脉采血约0.3毫升，在酒精灯火焰旁，自橡皮塞向培养瓶内（内含有生长培养基5毫升）接种，每瓶0.5毫升左右，轻轻摇动几次。
3. 培养：直立置37ºC±0.5ºC恒温箱内培养，培养66~72小时。
4. 秋水仙素处理：培养终止前在培养物中加入浓度为40微克/毫升的秋水仙素0.05~0.1毫升,最终浓度为0.4~0.8微克/毫升，置温箱中处理2~4小时。
5.（两人一组）低渗处理：低渗液的种类较多，如0.075mol/L的KCL溶液，0.95%的枸橼酸钠溶液，用蒸馏水稀释4倍的Hanks液,也可直接用蒸馏水。本实验选用KCL溶液，秋水仙素处理完毕，小心的从温箱取出培养瓶，用滴管吸弃上清液，培养物沉积在瓶底，然后加入温育的低渗液5毫升，用滴管轻轻冲打成细胞悬液，分装入两个离心管中，置37℃温箱内处理20分钟，使红细胞破碎，白细胞膨胀。
6. 离心：以每分钟1000转，离心5分钟，弃去上清液，收集白细胞。
7. 固定：固定液为甲醇：冰醋酸=3：1。每只离心管中，加入固定液2毫升，立即用滴管轻轻冲打成细胞悬液，在室温中固定15分钟后，离心，倒去上清液，留下白细胞。
8. 再固定：加入固定液1毫升，用吸管轻轻打散，室温下继续固定15分钟（过夜也可以）。
9. 再离心：倒去上清液，留下白细胞制片。
五、实验注意事项
1．接种的血样愈新鲜愈好，最好是在采血后24小时内进行培养，如果不能立刻培养，应置于4℃存放，避免保存时间过久，会影响细胞的活力。
2．在培养中成败的关键，除了至为重要的PHA的效价外，培养的温度和培养液的酸碱度也十分重要。人的外周血淋巴细胞培养最适温度为37±0.5℃。培养液的最适pH7.2～7.4。
3．培养过程中，如发现血样凝集，可将培养瓶轻轻振荡，使凝块散开，继续放回37℃恒温箱内培养。
4． 制片过程中，如发现细胞膨胀得不大，细胞膜没有破裂，染色体聚集一团伸展不开，可将固定时间延长数小时或过夜。
