3. 酶切产物的琼脂糖电泳
(1)在100ml电泳缓冲液(1TAE或0.5TBE)中加入1g琼脂糖,加热熔化,注意观察,当心煮沸的液体,溢出!。当凝胶冷却至60℃左右时加入5ul溴化乙锭溶液(终浓度为1ug/ml),充分混匀。
(2)先用透明胶带封固胶托边缘,放好梳子,然后再倒入凝胶(凝胶厚度在5mm左右)。
(3)在凝胶完全凝固后(室温放置30-45分钟),小心移去梳子和透明胶带,将凝胶放入电泳槽中,加入电泳缓冲液(液面超过胶带约2-3mm)。
(4)取已制备好的酶切DNA样品,加入1/5样品缓冲液,充分混匀。用移液器将样品小心地加入点样孔。在不同的点样孔中,分别加入DNA分子量标记物,对照以及酶切DNA样品各5-10ml。
(5)盖上电泳槽,打开电源并调节电压(通常用50-100伏),电泳40-60分钟(注意:DNA样品从负极向正极泳动)。
4. 结果观察与分析
关闭电源,取出凝胶,在紫外灯下观察DNA的迁移位置,并讨论实验结果。判断CS与哪一个DNA样品是同一个样品,找出罪犯。
五. 注意事项
(1)酶切时,应尽量减少反应中的加水量以使反应体系减到最小。但要确保酶体积不超过反应总体积的十分之一,否则限制酶活性将受到甘油的抑制。
(2)进行酶切消化时,将除酶以外的所有反应成分加入后再从冰箱中取出酶,并应放置于冰上。每次取酶时都应换一个无菌吸头 。操作要尽可能快,用完后立即将酶放回冰箱。
(3)溴化乙锭是一种强烈的致癌物质,使用时必须带手套 。实验结束后,含溴化乙锭的凝胶要进行净化处理。
六. 思考题
对琼脂糖凝胶的电泳结果进行简单的描述,找出罪犯


