2.化学试剂和溶液

（1） DNA样品反应缓冲液：100mM Tris, 200mM NaCl, 20mM MgCl₂, 2mM DTT, pH 8.0。
（2）EcoRⅠ限制性内切酶
（3）PstⅠ限制性内切酶
（4）电泳缓冲液 （50×
（4）TAE

Tris 242g

冰醋酸 57.1ml

EDTA（0.5mol/L pH 8.0） 100ml

使用时用蒸馏水稀释50倍。
（5）样品缓冲液（DNA sample loading dye）
0.25%溴酚蓝
0.25%二甲苯青
40%（W/V）蔗糖
（6）溴化乙锭（EB） 10mg/ml
（7）琼脂糖agarose（电泳级）
（8）DNA分子量标记物：Lambda HindⅢ DNA markers

3. 仪器设备和消耗品

电泳仪、电泳槽、样品梳、微波炉、水浴锅、移液器（10μl，200μl，1000μl）、离心管、一次性枪头（200μl，1000μl）。

四. 实验步骤

1. DNA样品的制备

采集生物检测样本，在弱碱和螯合剂存在条件下进行组织匀浆，溶解细胞或细胞核膜；利用阴离子去垢剂和蛋白酶，在37孵化数小时，消化蛋白质分离DNA；使用有机溶剂如苯酚、氯仿等除去残余蛋白质，萃取DNA；用乙醇或某些盐类从溶液中沉淀DNA。

由于一般采集的样本中的DNA都有不同程度的降解，采用PCR技术扩增出完整的基因组DNA或者特定的高可变位点，以此制备出的DNA样品备用。

2. DNA样品的酶切反应

设置DNA样品的双酶切反应，按下列顺序加样（体积：μl）：

                                      反应管   对照管

样品DNA                          10         10

反应缓冲液（10×）       2           2

双蒸水                               6           8

EcoRⅠ                              1           0

PstⅠ                                  1           0

总体积                               20        20

加完反应液，温和混匀，置于37℃水浴中反应1小时，取出备用。