3、组织：肠黏膜

目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达

应用TRIPURE提取蛋白质步骤：

含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）

倒转混匀，置室温10min

离心：12000 g，10min，4度，弃上清

加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）

振荡，置室温20min

离心： 7500g，5 min，4度，弃上清

重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次

沉淀中加入100％乙醇 2ml

充分振荡混匀，置室温20 min

离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀

1％SDS溶解沉淀

离心：10000g，10min，4度

取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）

存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。

解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。

上一页  [1] [2] [3] 下一页