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蛋白质提取的方法总汇
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-11-25

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    、植物组织蛋白质提取方法

    1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。

    2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。

    3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

    4、提取上清夜,样品制备完成。

    蛋白质提取液:300ml

    1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml

    2、甘油(Glycerol)75ml

    3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g

    这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!

    2、植物组织蛋白质提取方法

    三氯醋酸—丙酮沉淀法

    1、在液氮中研磨叶片

    2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

    3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。

    4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。

    5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。

    药品:

    提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮

    裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

    这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!

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