2．细胞融合的步骤
（1）制备饲养细胞层：一般选用小鼠腹腔巨噬细胞。
与免疫小鼠相同品系的小鼠，常用BALB/C小鼠，6～10周
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拉颈 处死，浸泡在75%酒精内，3～5min
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用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜
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用无菌注射器注入5～6ml预冷的培养液（严禁刺破肠管）
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反复冲洗，吸出冲洗液
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冲洗液放入10ml离心管，1200rpm/分离5～6min
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用20%小牛血清（NCS）或胎牛血清（FCS）的培养液混悬，调整细胞数至1×105/ml
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加入96孔板，100μl/孔
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放入37。c CO2孵箱培养
（2）制备免疫脾细胞
最后一次加强免疫3天后小鼠拉颈处死
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无菌取脾脏，培养液洗 一次
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脾脏研碎，过不锈钢筛网
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离心，细胞用培养液洗2次
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计数
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取108脾淋巴细胞悬液备用
（3）制备骨髓瘤细胞
取对数生长骨髓瘤细胞离心
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用无血清培养液洗2次
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计数，取得×107细胞备用
（4）融合
