生物秀首页 新闻前沿 产业资讯 实验技术 仪器教程 生物考研 资源下载 生物人 物秀商城 生物论坛 图片 专业 博客 易生物 视频动画
生命科学实验中心
导航: 生物秀 > 实验 > 细胞实验 > 细胞技术 > 正文
  • 倾力提供最优!
  • 生物秀实验频道
细胞凋亡检测-生化特征的检测方法
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-11-23

     
    观测
    1.取一定量的标记DNA稀释后在1.8%琼脂糖凝胶上点样,50V电泳约2h。
    2.电泳后的凝胶置滤纸上烘干,进行放射自显影。
    3.含32P标记DNA电泳干凝胶进行同位素液闪测定,计算放射活性。
    二、原位末端标记技术
     1)DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移(ISNT)
    1.切片常规脱蜡,梯度乙醇复水化。
    2.将切片组织浸入2×SSC液中,80℃,20min,然后蒸馏水冲尽。
    3.0.5%胃蛋白酶(pH2.0)37℃消化0~20min,PBS洗尽。
    4.用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A,5min。缓冲液A:50mmol/L Tris-HCl, 5mmol/L MgCl2, 10mmol/L β-巯基乙醇,0.005%BSA,pH7.5。
    5.弃去缓冲液A,滴加标记液约50μl,25℃温育1h。标记反应液:0.005mmol/L dNTP, 0.005mol/L biotin-16-dUTP, 25U/ml Klenow大片段。
    6.PBS漂洗2次,各3min。
    7.内源酶阻断剂阻断15min。
    8.PBS洗2次,各3min。
    9.滴加HRP-avidin覆盖组织,室温下30min。
    10.  PBS洗2次,各3min。
    11.  DAB-H2O2显色约5min。
    12.  流水冲洗后,苏木素复染1min。常规脱水,透明,封片。
    13.  阴性对照片在第5步改加不含Klenow的标记液,余同。
     
    2)TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)
    1.切片常规脱蜡,复水,后续过程在湿盒内进行。
    2.3%的H2O2阻断内源性辣根过氧化物酶30min。
    3.0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。
    4.切片浸泡在2×SSC 80℃ 20min。
    5.0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。
    6.蛋白酶K或胃蛋白酶消化0~20min。
    7.0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。
    8.TdT缓冲液孵育10min。
    9.TdT反应液37℃孵育1h。
    10.  切片浸泡在2×SSC溶液10min,以终止反应。
    11.  0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。
    12.  链卵白素标记的辣根过氧化物酶孵育30min。
    13.  0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。
    14.  0.04%的DAB显色5~10min,镜下控制时间。
    15.  苏木素复染3~5min,常规复水,透明和封片。

    上一页  [1] [2] [3] 

关于〖细胞凋亡检测-生化特征的检测方法〗的最新评论
昵称:      评分: 1分 2分 3分 4分 5分
内容:
生物秀实验频道
设为首页 | 加入收藏 | 关于我们 | 战略伙伴 | 友情链接 | 法律声明 | 广告服务 | 联系我们 | 网站地图
Copyright © 2003-2008 生物秀 (中国·生物秀科技) 版权所有 信产部备案:鲁ICP备05001831号
客服信箱:info@bbioo.com  客服电话:15800302289  客服QQ:254857951
www.bbioo.com All Rights Reserved.