2）琼脂糖凝胶电泳的定量检测
简易末端标记法
1．按常规提取细胞DNA。
2．在0.5ml的EP管中加入细胞DNA，反应体系如下：细胞DNA 0.5～1.0μg，10×缓冲液2μl，32P-dATP（或-dCTP）0.5μCi，Klenow聚合酶5U，双蒸水加至20μl。
3．混匀后稍加离心，室温反应30min。
4．加1μl 0.5mol EDTA终止反应。
5．常规酚/氯仿/异戊醇抽提1次，无水乙醇沉淀DNA，真空抽干。
6．溶于20μl的TE缓冲液中。
7．取标记DNA在1.8％琼脂糖凝胶上点样，50V电泳约2h。
8．电泳后的凝集置滤纸上烘干，进行放射自显影。
5’末端32P标记法
细胞DNA的提取
1．细胞悬液离心后，沉淀加消化缓冲液0.5ml，50℃ 3～5h，或37℃过夜。
2．用等体积的酚：氯仿：异戊醇抽提细胞裂解液。
3．将水相转移至新的试管，加入150mmol/L乙酸钠和10mmol/L氯化镁。
4．加入2倍体积的预冷无水乙醇，置液氮5min或－20℃ 12h。
5．12 000r/min离心沉淀DNA，70％乙醇洗1次后，真空抽干。
6．溶于20μl的TE缓冲液中。
7．加入终浓度为10μg/ml RNase，37℃，30min。
8．同法用等体积酚：氯仿：异戊醇抽提，乙醇沉淀，真空抽干。
9．溶液20μl的TE缓冲液中，－20℃保存备用。DNA含量测定：用260nm波长紫外分光光度计：吸光单位为20时约为1mg/ml DNA。
DNA 5’末端脱磷酸
1．取纯化的细胞DNA 10μg，然后加入：10×CIP 2μl（1U），双蒸水加至50μl。
2．37℃水浴2h。
3．90℃水浴5min以灭活CIP。
4．用等体积酚：氯仿：异戊醇抽提，乙醇沉淀，真空抽干。
DNA 5’末端32P标记
1．将脱磷酸样品DNA置冰浴上，再加双蒸水10μl，10×缓冲液2μl，T4多核苷酸激酶10U，32P-ATP 740kBq（20μCi），双蒸水加至20μl。
2．混合后，37℃水浴60min。
3．加入1μl的0.5mol/L EDTA，90℃灭活5min。
