一、试剂 
1 、 10 × TBE （ pH 8.3 ）：
2 、 46% 尿素溶液：
3 、 20% 聚丙烯酰胺溶液
4 、 10% 过硫酸胺
5 、引物
6 、模板
7 、 DNA 聚合酶 
8 、放射性标记的 dNTP 和 ddNTP 贮存液 
9、TEMED 
二、操作方法
（一）由双链质粒制备单链DNA膜板
取质粒 DNA （溶于双离蒸去离子水中） 8μl （ 1.5 ～ 2ug ） 
↓ 
加 2mol   NaOH   2ul ，混匀后稍加离心，置室温 10min 
↓ 
加 3mol 乙酸钠（ pH5.2 ） 3μl 
双蒸去离子水 7μl 
   无水乙醇 60μl 
↓ 
置液氮 10min ，离心 10min （ 13krpm ）， 
↓
加 70%乙醇洗1次，离心 （ 13krpm ） 
↓
弃上清，真空抽干，溶于 10ul双 蒸去离子水中 
↓ 
取样，电泳鉴定 
（二）聚丙烯酰胺/尿素胶制备： 
将玻板洗净，拭干； 70% 乙醇洗，凉干；内层涂硅油， 
重蒸水洗净，吹干 
↓ 
混合： 20% 聚丙烯酰胺液 20ml 
    10 × TBE          5ml
     46%尿素           25ml
     总计40ml过滤纸滤过
↓
加 10%过硫酸胺（AP）250μl；用双蒸去离子水定容至100ml，混匀 
↓ 
倒胶前加入 TEMED 50μl，混匀 
↓ 
灌胶，待凝胶聚合后，将测序胶板安装于测序电泳槽中 
↓ 
电泳槽中加入 800ml1 × TBE 
↓ 
预电泳 

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