【程序】
（1）细胞：选对数生长期细胞；收集细胞24小时前换液一次；
（2）计数：按常规法把细胞制成细胞悬液，计数、令细胞密度达5×106/ml（如一瓶细胞数量不足则用两瓶或更多的细胞），离心去上清，吸入离心管中；
（3）冻存液：先用培养液9分+DMSO 1分（或甘油）配成10%的DMSO冻存液；按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬；
（4）分装：分装入无菌安瓿中，每安瓿加1.5ml细胞悬液；
（5）封口：用塑料安瓿时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安瓿口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安瓿缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，溶解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找；
（6）冻存：当前已有专用细胞冻存器；在无冻存器的情况下，可用手工办法：从把冻存物悬在液氮罐口开始算起，按-1℃/分钟速度，在30～40分钟内，下降到液氮面，再停30分钟后，直投入液氮中。
注意：①操作时应带保护眼镜和手套，以免液氮伤人；②细胞注入安瓿中后一定 封严；最好使用塑料制螺口安瓿，但一定要拧紧螺帽。
四、细胞复苏
【用品】
75%酒精 少许
培养液 50.0ml
BSS 50.0ml
离心管 6支
搪瓷罐（带盖） 1个
【程序】
（1）从液氮罐中取出安瓿；有时因安瓿未封严，浸入了液氮，取出后因安瓿内液氮迅速气化而发生爆炸（力量有限），因而应带防护眼镜和手套；
（2）迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻； （3）剪开纱布口袋，取出安瓿，用70%酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖（如为玻璃安瓿则折断安瓿颈部）；用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮；
（4）低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心；
（5）加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。
注意：安瓿内冻存细胞数量要充分，在融解后能充分做1：10倍或1：20倍的稀释（细胞数/毫升）；一般每瓶细胞接种浓度为5×105/ml，因此冻存密度应达到107/ml，在稀释20倍时，仍能保持5×105/ml数量。
