原代心肌细胞培养方法探讨--生物秀

3 讨论

构成心脏的细胞中约有80％为心肌细胞外，还有主要为成纤维细胞等非心肌细胞，本实验所取组织块尽量细小外，并一定要冲洗干净，放入培养瓶内时培养液不要过多易于贴壁，翻转瓶时间不要过长避免干涸，采用此种方法主要是便于心肌细胞迅速贴壁生长，培养液中加入Brdu抑制成纤维细胞DNA合成达到抑制增生的目的[1]；传代时先吹去组织块，然后依据心肌细胞的特性，快消化、轻消化，可看到细胞形态小的心肌细胞变圆，而细胞形态大的成纤维细胞仍伸展，立即中止消化迅速传代，仍用含有Brdu的培养液培养，3～4天后细胞形成致密单层即可进行实验。此种方法培养的细胞可能与含有少量成纤维细胞促进心肌细胞贴壁和生长，有研究报道[2]成纤维细胞条件培养液有提高心肌细胞贴壁率及搏动率的作用，表明有促进心肌细胞搏动和生长的因子，也提示成纤维细胞与心肌细胞间可能存在着某种信号联系。我们也观察到培养的心肌细胞成片搏动长达20多天。

心肌细胞搏动表明具有自律性的心肌细胞活性和状态良好；心肌细胞HE染色观察形态和贴壁情况；透射电镜观察可观察心肌细胞的超微结构肌丝和线粒体活性等[3]；对台盼蓝摄取反映细胞膜损伤和细胞死亡；肌动蛋白HHF35免疫细胞化学反映在细胞浆中阳性表达，可间接反映心肌细胞纯度。通过反复实验我们体会到：①要选择24h内的新生鼠，而以12h内培养效果最佳。②严格无菌操作，打开胸腔后迅速摘取跳动的心脏，操作要熟练快捷。③细胞贴壁生长成致密单层后尽早进行实验，否则会降低心肌细胞的纯度，不利于对单纯心肌细胞的研究。④传代消化时胰蛋白酶浓度不要过高，时间不要过长，最好在显微镜下观察，以免较牢贴壁的非心肌细胞浮起。⑤选用飞片要薄，要紧贴培养瓶（板）不要留有气泡，可滴加少许培养液后再放置飞片。⑥要注意培养液的稳定性，适量的血清浓度，适宜的pH。只有这样才能培养出生长迅速、纯度高、活性好的心肌细胞。

上一页 [1] [2] [3]

实验首页

实验论坛

实验软件

实验电书

实验视频

实验下载

仪器教程

文献检索

数据导航

生物公司

光盘刻录

实验助手

实验频道更新

实验论坛新帖

实验关注排行

相关实验文章

生物软件下载

仪器使用教程