2 灵敏度
细胞因子具有很强的生物学活性，其生物分析法的灵敏度极高。然而，在测定血浆中细胞因子正常浓度时，难以确定免疫分析法令人满意的灵敏度。不同细胞因子的参考值变化很大，难以定义其参考值范围。如Damas等 ［7］ 在研 究细胞因子与败血症时，使用两步免疫放射测定实验（IRˉMA）测定IL-6（灵敏度:5ng/ml）一步IRMA法测定TNF-α（灵敏度:5ng/L）和IL-1β（灵敏度:4ng/L），在正常血清中未测得上述细胞因子。而Riikonen等使用具有相似检测限的RIA法，在20例健康儿童中，IL-1β的平均浓度为12.1ng/L，IL-6的平均浓度为83ng/L;在71例健康儿童中，TNF-α的平均浓度为40±2ng/L。由此可见，不同的免疫分析方法之间存在极大的差异，其灵敏度变化可能是由于其准确度和特异性的不同而引起。
3 准确度和特异性
影响细胞因子检测准确度和特异性的因素有:（1）抗体:单抗的表位识别;（2）细胞因子:多种分子形式，结合蛋白复合物、抑制剂和可溶性受体复合物;（3）血浆基质:干扰抗体，异嗜性抗体和类风湿因子;（4）标准:重组参考物质可能不显示与样品平行的剂量———反应曲线。
3.1 细胞因子结合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能结合从细胞进入血浆的可溶性受体或特异的拮抗剂。免疫分析法是否能识别这样的结合形式几乎是未知的，但是对TNF的研究得出了一些重要结论。20世纪80年代后期，《Lancet》上发表了大量关于癌症病人TNF-α测定缺乏可靠性和生物分析法与免疫分析法关系的文章。但使用竞争性免疫分析法时，癌症病人与败血症病人的TNF-α是可被检测的。而ELISA法由于不能测定TNF-α与P 55 TNF受体的结合物而无法测定癌症病人血浆中的TNF-α。
3.2 血浆中包含几种形式的IL-6分子，它们与一些抗血清的作用较弱，缺乏生物学活性并与其它血浆蛋白质以及IL-6的可溶性受体组成复合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析测定其在正常血清中的浓度为0或在10～75ng/L范围，败血症病人的IL-6浓度升高到1～2μg/L，脑膜炎病人的IL-6浓度升到200μg/L。然而，May等说明大多数的检测方法仅仅测定了低分子量的IL-6，他们采用能识别IL-6高分子量的单抗，测得在正常血清中IL-6的浓度为1～10μg/L，并且在1例骨髓移植后病人的血清样品中，测得IL-6的浓度为5～10mg/L。
3.3 多种分子的形式 一些细胞因子的多种分子形式已被充分认识，但是其对细胞因子测定影响的重要性并未得到彻底的研究。IL-6是一个最好的例子，它由一个位于第7染色体上，包含5个外显子的单一多杰基因编码。其氨基酸序列包括几个潜在的O-糖基位点，2个N-糖基位点和几个丝氨酸磷酸化位点。由细菌产生的重组IL-6的相对分子量为21Kd。人成纤维细胞至少分泌6种形式，相对分子量为23～30Kd的IL-6，它们均是糖蛋白，能在败血症病人的血浆中被检测。人内皮细胞分泌一种分子量为45Kd的IL-6，它似乎是血浆中的IL-6的主要存在形式。

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