在细胞凋亡检测中DNA提取方法的优化

夏 飞 刘胜武 魏雅稚 肖 凌

【摘要】
目的 比较不同DNA提取方法对凋亡细胞内断裂DNA片段的提取效果及其影响因素。

方法 采用试剂盒法、磷酸盐/柠檬酸缓冲液抽提法提取地塞米松诱导5h胸腺细胞内的DNA片段，后者分别经真空离心浓缩法和异丙醇及70％乙醇沉淀漂洗法提取DNA片段，1％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察。

结果 磷酸盐/柠檬酸缓冲液抽提法对低浓度细胞内的小DNA片段有显著的抽提效果，紫外灯下可见明显的小DNA片段条带，改用异丙醇和70%乙醇抽提法以代替真空离心浓缩后仍然可见代表小DNA片段的条带；试剂盒提取法可提取凋亡细胞内的各种DNA片段，紫外灯下可见明显的“梯状条带”。

结论 以上二种方法实验所需时间较少，且都避免了酚等有毒试剂的使用。试剂盒提取法对凋亡细胞DNA片段的提取效果较好，但费用较高；磷酸盐/柠檬酸缓冲液抽提法可高效地提取凋亡细胞中的小片段DNA，且异丙醇和70％乙醇沉淀抽提法可替代真空离心浓缩，更易于此种方法地推广。

【关键词】 细胞凋亡；磷酸盐/柠檬酸缓冲液法；DNA片段化

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