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植物组织中淀粉含量的测定
作者:未知 来源:未知 时间:2005-11-19
    【原理】

    淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。

    【仪器与用具】

    电子天平;容量瓶:100ml×450ml×2;漏斗;小试管若干支;电炉;刻度吸管0.5ml×12.0ml×35ml×4;分光光度计;记号笔。

    【试剂】

        1)浓硫酸(比重1.84);

    29.2mol/L HClO4

    32%蒽酮试剂:同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);

    4)淀粉标准液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加6070ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,即为每ml含淀粉100μg的标准液。

    【方法】

        1.标准曲线制作

    取小试管11支从010编号,按表24-3加入溶液和蒸馏水。

    以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,见方法一或方法二,绘制相应的标准曲线。

    24-3  各试管加入标准液和蒸馏水量

     

    0

    12

    34

    56

    78

    910

    淀粉标准液(ml)

    0

    0.4

    0.8

    1.2

    1.6

    2.0

    水(ml

    2.0

    1.6

    1.2

    0.8

    0.4

    0

    淀粉含量(mg

    0

    40

    80

    120

    160

    200

        2.样品提取

    将提取可溶性糖以后的残渣,移入50ml容量瓶中,加20ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷却后,混匀,用滤纸过滤,并用蒸馏水定容(或以2500r/min离心10min)。

    3.测定  可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

    按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时,在单糖残基上加了1分子水,因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

    淀粉含量(%=

    式中  C-标准曲线查得的淀粉含量(μg);

    V-提取液总量(ml);

    a-显色时取液量(ml);

    W-样品重(g)。

    注:淀粉水解完全度试验  样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品,在酸解过滤后,将其残渣加上2ml水,搅拌均匀,吸2滴于白瓷盘上,加2I2-KI溶液,显微镜下观察,若出现紫蓝色颗粒,证明水解不完全,其正式测试样品需再加高氯酸水解,直至不出现蓝紫色为止。

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