目前,稳定参考品仍然未定。ACD或CPD抗凝血液可作为控制品,室间质评样品和短期校准品。因只能稳定数周,不符合国际参考标准的基本性能。另一方面,固定血细胞能稳定数年,但其密度、变形性、形态和流变性能会影响它们在计数系统中的行为,需形状因子纠正才能与新鲜血有可比性。“形状因子”主要影响红细胞,新鲜红细胞在通过计数系统时,呈纺锤形,而固定红细胞呈铜钱形。但是,计数系统中,新鲜白细胞和血小板保持球形,固定也不影响形态,其形状因子为1.0。稳定胶乳颗粒有同样的局限性,优点是可根据颗粒的特定大小生产单一的颗粒,且标准差极小。ICSH和欧盟参考BCR标准局建立了3批特别精度的胶乳颗粒,在显微镜下,用经校准标尺测得直径分别为2.23,4.8和9.445µm,呈球形,计算体积为5.8,58和441fL,此物质能直接溯源到一级长度计量标准。在颗粒计数仪中,形状因子由真实体积和测定体积的差异得出。结果见表2。
表2 参考仪器和常规仪器的形状因子计算
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计算体积(fL) |
参考仪器(fL) |
常规仪器(fL) |
形状因子(fL) |
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5.8 |
5.74 |
5.67 |
1.0 |
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58 |
76 |
76 |
1.3 |
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441 |
超出范围 |
超出范围 |
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理论上,胶乳制剂能用于校准一级参考仪器,然后用于新鲜血液或稳定血液的定值。以此调节所有计数仪,给出可比结果,所用校准品必须溯源到一级参考标准。国际上,测量结果的溯源链模式如下图左(图略)。在血液细胞计数方面,生产厂家的校准品溯源链模式如下图右(图略)。
(一)仪器的校准方法
现代血液分析仪的校准在操作手册中都有严格的方法,在校准前,必须确认仪器分析性能,包括精度、线性、交叉污染等指标。采用新鲜血或稳定血液校准时,应考虑不同的影响因素,分述如下。
1.新鲜血液作为校准品
以新鲜血液作为校准品,其值必须用参考方法或选择性方法来确定。尤其是血液的新鲜程度,将明显影响校准结果。其次,根据校准准确度要求,为了减少随机误差,达到校准,必须采用足够数量的标本。表3显示了标本数量和校准准确度之间关系。
表3 全血校准:达到预计准确度的最少数量和标本要求
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Parameter |
Desired accuracy(%) |
Number of specimens |
Characteristics |
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Red blood count |
1 |
5 |
RBC between 2000×109and 6000×109 |
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2 |
2 |
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3 |
1 |
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White blood count |
2 |
11 |
WBC between 3.0×109and 40×109 |
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4 |
3 |
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Packed cell volume |
2 |
10 |
Oxygenate fully |
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3 |
5 |
MCHC normal |
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4 |
3 |
MCV normal |
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Hemoglobin |
1 |
7 |
WBC less than 40×109 |
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2 |
2 |
|
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3 |
1 |
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Platelet count |
2 |
15 |
MPV greater than 5.5 fl |
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4 |
4 |
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|
6 |
2 |
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