二、校准
现代多参数血液分析仪的校准主要通过调整每个同道的稀释因子和信号强度达到。目前，至少有6个参数需要调整，包括白细胞计数、红细胞计数、红细胞压积或MCV、血红蛋白浓度、血小板计数和白细胞分类。
调整方法有两种：一是采用参考方法定值的新鲜血液，与仪器测定值进行比较；二是采用中间物质，如校准品，一种稳定化的血液，通过测定相对于全血的回收率，得到恰当的校准值。无论何种方法，首先必须建立每个参数参考方法/标准品，得到全血标本的参考值。参考方法和参考品由标准化组织建立，如ICSH或NCCLS。
表1列举了血液分析仪的参考方法。可见，部分参数有一种以上参考方法，部分没有参考方法或待建立。这是造成不同仪器间偏倚因不同参考方法而异，虽然这些差异是很细微的。
表1 现代血液分析仪实践指南
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参 数 |
ICSH |
NCCLS |
争论点 |
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血红蛋白 |
HiCN国际参考品 |
H15，HiCN |
排除红细胞基质浑浊 |
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红细胞压积 |
微量离心法 |
H7，微量离心法 |
残留血浆 |
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白细胞计数 |
ZBI方法 |
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红细胞计数 |
ZBI方法 |
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血小板计数 |
流式细胞仪间接计数血小板 |
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直接/间接 |
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白细胞分类 |
流式细胞仪（待建立） |
H20，显微镜法 |
精度 |
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细胞大小分析 |
正态拟合 |
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红细胞正态拟合 |
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平均红细胞体积 |
待建立 |
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网织细胞计数 |
流式细胞计数和活体染色 |
H44，流式细胞计数和活性染色 |
目视/流式 |
1.血红蛋白量：ICSH，1978年，1996年。NCCLS和ICSH均推荐的参考方法，测定溶解红细胞中血红蛋白转化成氰化高铁血红蛋白的吸光度。
2.血细胞压积：ICSH，1980年，2001年。ICSH参考方法采用Wintrobe管，纠正残留血浆。NCCLS采用微量管，不纠正残留血浆。因为在口径小的试管中残留血浆少，两者之间差约1%左右。
3.白细胞分类计数：NCCLS，1992年。NCCLS白细胞分类参考方法H20-A，用Romanowsky染色，镜下分析400个白细胞。
4.红细胞计数，ICSH，1994年。红细胞计数参考方法用特定的半自动血细胞计数仪，测定固定容量的颗粒数（利用Coulter ZBI的电子细胞计数仪符合该标准）。用等渗缓冲生理盐水作1/50000倍稀释，测量和纠正重合误差。
单通道计数仪，能用于检测通过小孔的红细胞、白细胞，小孔为100µm和70µm，其长度：直径比率为1。用水平压力计控制稀释细胞悬液的流量为1ml，与脉冲分析仪连接，设置阈值下限，微型计算机采集数据纠正重合误差。对于新鲜血和乳胶颗粒重复测定精度可达0.35%。
5.白细胞计数：ICSH，1994年。用Coulter ZBI法计数。只作一次稀释，加入Zapoglobin后在1-5分钟内计数。
6.血小板计数：ICSH，2001年。用流式细胞仪法，间接法计数血小板。采用EDTA抗凝全血，加特异性荧光标单抗（CD41和CD61）染色血小板，被染色血小板在流式细胞仪上根据荧光强度和散射光，得出PLT和RBC比率，通过准确计数RBC，就可算得准确的血小板值。计数至少50000个血小板，精度可达2%。用血细胞计数盘直接计数血小板的方法，因为计数盘误差为1%，若计数500个血小板，精度为5%。
