[目的]

了解红细胞和白细胞的原理并掌握其计数的方法。

[原理]

血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板，而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下记录一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算成每立方毫米血液中的血细胞个数。

[材料及用具]

血球计，显微镜，生理盐水，蒸馏水，抗凝血，血球计数板，1.5毫升吸管，血红蛋白吸管，试管。

[方法及步骤]

• 实验前，首先检查计数板及血红蛋白吸管是否清洁，如有污垢，应先洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下，熟悉计数室的构造。
• 血细胞计数板的结构：计数板是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有4条直槽，内侧两槽中间有一条横槽把中部隔成两个长方形的平台。此平台比整个玻璃板的平面低0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间距离为0.1 mm。平台中心部分各以3mm长，3mm宽精确划分为9个大方格，称为计数室。每个大方格面积为1mm2，体积为0.1 mm3。四角的大方格，又各分为16个中方格，适用于白细胞计数。中央的大方格由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，体积为0.004 mm3。每个中方格又各分成16个小方格，适用于红细胞计数。
• 用血红蛋白吸管吸取20立方毫米的血液，如血液稍超过刻度时，可用手指轻触吸管口，慢慢移动，可以吸出一些血液，达到要求的刻度。吸时不能有气泡，否则要重做。用干棉球擦去管外面的血液，再放入盛有4毫升生理盐水的试管内，并混匀，然后在计数室内进行计数。
• 白血球稀释方法：用血红蛋白吸管吸取20立方毫米的血液，再加到盛有0.38毫升白血球稀释液的试管内，并混匀，然后在计数室内进行计数。
• 将计数室上的盖玻片放妥后，弃去血红蛋白管内流出的第1—2滴稀释血液，然后滴半滴于计数室与盖玻片交界处，稀释血液可自动均匀地渗入计数室。放置1—2分钟，待红细胞或白细胞下沉后，就可将计数室置于低倍镜下进行计数。
• 计数时，要注意显微镜的载物台应绝对平置，不能倾斜，以免血细胞向一边集中。光线也不必过强。
• 红细胞在低倍镜下计数，记录计数室四角及中间共五个中方格（共80个小方格）中所有的红细胞数。白细胞的计数方法是：在低倍镜下计数，计数室四角4个大方格（每个大方格分16个中方格）中的白细胞的总数。对四边压线的血细胞，只数其中相连的两边（如上边和左边），另两边（如下边和右边）的则不计。

如发现各中方格红细胞数目相差20个以上或各大格的白细胞数目相差8个以上，表明血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。

红细胞的计数方法是，将所得的红细胞数乘以10，000（如稀释100倍则乘以5000），既为要求的每一立方毫米血液中的红细胞数。

白细胞计数方法是，将数得的白细胞数乘以50或25，既得一立方毫米血液中白细胞的总数。