2.3.2  自动细胞核内注射和细胞质内注射
1  按上述手动系统的方法将针头调整至视野中间，不同的是通过控制面板自动控制微操作部分。
2  工作放大倍数为320×，下降针头，使之触及细胞核或核周间隙上方的细胞表面，直到细胞表面见到一个轻微的压迹。
3  通过控制部分，设定细胞核内或细胞质内注射的定位参数。
4  将针头略提起，离开细胞表面几微米，选择一个新细胞，按下操纵杆上方的按钮进行微注射。针头首先在水平面上做逆向轨迹运动，然后朝向细胞做出一个迅速的轴向运动，正好刺入细胞内预先设定好的坐标位置，这时微操作仪的控制部分，激活注射压力，持续时间已经预先设定好。针头回到原来的位置。
5  在必要的情况下，可以在控制面板上修正各种参数，因为盖玻片和平皿的表面不是十分平整，所以当从盖玻片的一个地方移动到另一个地方进行注射时，一定要重新调整细胞核内或细胞质的坐标。

3　对注射了荧光标记物的细胞的分析
荧光标记物，如FITC-葡聚糖等常用来作注射用标记物，以分辨出已经注射的细胞。浓度为0.25%～1%时，这种物质的毒性很小，而且在细胞增殖的2～4天仍可见。
3.1  在PBS中轻轻冲洗注射过的细胞两次。
3.2  用甲醇（2min）或PFA/GA（5min）快速固定
3.3  用去离子水快速冲洗盖玻片。
3.4  滴一滴Mowiol，将盖玻片装到载玻片上。

[注意事项]
1  在整个过程中，注射针尖应远离人员和实验室中的仪器。注射针在持针器上安装不牢时，注射器、管子及注射针内的压力，可能将注射针射出。
2  在反向充填液体时，适当地在显微镜下观察注射针尖，以决定在加压时是否注射针阻塞或偏斜。阻塞通常可通过将针尖轻轻敲击一个固定物而得以缓解。针尖偏斜的注射针是适合于显微注射的，但其使用应做细微调整或补偿注射中加压所造成的额外偏斜。
3  注射速度过快能扰乱细胞质成分，细胞裂解或细胞从底层移位。当注射体积小于估计的细胞体积的50%，并且注射样品的流动速度几乎不导致可见的细胞质移位时，注射效果最好。
4  用紫外光可看到注入标记物后的活细胞，但会对细胞造成不可恢复的损伤，因此应尽可能缩短紫外光照射时间。
5  如果对已经注射的细胞进行免疫荧光测定或其他处理，最好使用可固定的葡聚糖，以防在冲洗中造成标记物的扩散损失。

【注 意 事 项】
1．最优组分依使用的特定细胞种类而有明显的变化。如果努力优化电压和脉冲宽度电穿孔结果仍不令人满意，就应尝试改变穿孔介质。
2．影响电穿孔/电融合的另一重要因素与细胞状态有关，为达到最高效率，必须收集对数生长中期的细胞。

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