2.2 HBsAg表达量 融合细胞培养至第11d时检测其血凝滴度，结果3块板均表现出强阳性，其中有2/3孔滴度在1∶1024以上，最高可达1∶2048，而未融合的对照细胞滴度则较低，多数孔为1∶128，仅有少数达到1∶256。但是继续培养并克隆高表达孔，细胞未能持续稳定地高表达。
    3 讨论
    3.1 选择培养基的改进 传统的B淋巴细胞杂交瘤技术是用骨髓瘤细胞与以特异性Ag刺激的B淋巴细胞融合制备特异性Ab，选择培养基用的是HAT。NS-1细胞及其同核体为HGPRT - ，其合成DNA的主要途径被A（氨甲蝶呤）阻断，又缺乏HGPRT和TK，不能利用培养液中的H，T而死亡。B淋巴细胞及其同核体具有HGPRT和TK，可以通过应急途径合成DNA，但因不能在体外长期培养而死亡。只有杂交瘤细胞具有两种亲本的特性可存活。而NS-1细胞与CHO-C 28  细胞融合后，由于CHO-C 28  细胞是经MTX（氨甲蝶呤）加压筛选出来的，对A耐受， ［3，4］  而
且在体外可以长期培养，因此单纯用HAT无法杀死未融合的CHO-C 28  细胞及其同核体。我们尝试在1，2号板的HAT培养基中加入不同浓度的8-AG，因为CHO-C 28  细胞为HGPRT+，HG图1 1号板E10孔融合细胞照片， 100×普通光学显微镜 图2 3号板F10孔融合细胞照片， 100×普通光学显微镜PRT对底物要求不强，可以把8-AG结合入核酸中，引起核酸合成的干扰，导致细胞死亡 ［5］  ，而NS-1细胞为HGˉPRT - ，对8-AG耐受，唯有杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，能在HAT+8-AG培养基中选择性存活下来。通过对选择培养基的改进，我们得到了杂交瘤。3号板仍用传统的HAT培养基，结果无法将杂交瘤细胞与未融合的CHO-C 28  细胞及其同核体分开，给新细胞
株的建立及检测带来困难。
    3.2 HBsAg表达量的提高 细胞融合后，3块板中有2/3孔出现了瞬时高表达。Houssais ［6］  和Chencine等 ［7］  也作过类似的研究，Chenciner用SV40早期启动子在Vero细胞中表达HBsAg，其表达水平仅10ng/（10 6 细胞.d）。当将这些细胞与非洲绿猴或狒狒的肝原代细胞融合后，表达水平提高了50倍，达到514ng/（10 6 细胞.d）。这些都说明通过与骨髓瘤细胞融合提高HBsAg表达量是可能的。在此，我们仅对此方法提高HBsAg表达量进行了初步探索，对于融合    后细胞瞬时高表达的机理尚不明确，得到的杂交瘤细胞也 需进一步检测，而如何能够获得持续稳定的高效表达以及培养条件和选择培养基的作用等还需要进行更深一步的研究。
                                      参考文献
     1 李育阳.基因表达技术.北京:科学出版社，2001，2:151.
    2 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.北京:中国科学技术出版社，1999，11:313-320.
    3 静国忠.基因工程及其分子生物学基础.北京:北京大学出版社，1999，8:157-158.
    4 Kaufman R J，Wasley L C，Spiliotes A J et al.Mol Cell Biol，1985，5:1750-1759.
    5 鄂征.组织培养和分子细胞学技术.北京:北京出版社，1994，12:34-35.
    6 Houssais JF，Chencine N，Malpiece Y，Zilberfarb D.C R Acad Sci III，1986，303（17）:693-698.
    7 Chencine N，Delpeyroux F，Israel N，et al.Biotechnology，1990，8:858-862.  
  （收稿日期:2003-12-09） 
  作者单位:130062吉林长春生物制品研究所

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