试剂及仪器
一般设备见前；
培养基A：RPMI1640 + 2mmol/L 谷氨酰胺+ 1mmol/L丙酮酸钠+ 1 mmol/L非必需氨基酸+青霉素100U/ml, 链霉素100 µg/ml（有的实验室也加入10%NCTC109 培养基）
培养基B：培养基A +3% FCS （见后说明）
培养基C：培养基A + 1× HAT + 20% FCS（500ml）
50 × HAT液或粉剂（有商品）
PEG1500 （有商品，可即用）
1mol/L硫酸铜液
17mol/L NH4Cl 水溶液（消毒，用于红细胞溶解）
培养皿（直径100或60mm）
细胞粗滤器（筛孔：40 µm ）
操作步骤
一．脾细胞及骨髓瘤细胞制备
由小鼠分离的脾细胞作为抗体生成细胞的方法已有多种介绍。在许多实验室应用的操作方案仅稍有不同。淋巴结也可用为B细胞的来源。骨髓瘤细胞必须培养至少一周，要求在融合日要达到对数生长期。所有的实验操作均需在消毒条件下进行。
（一）脾细胞制备
1．分离取出脾脏，置于含7ml培养基B的培养皿中（在动物房进行），将培养皿移入垂直气流的通风橱中；
2．将脾脏移入另一含7ml培养基A的培养皿中，用镊子撕开脾脏，使大多数脾细胞释出；
3．用吸管吹打细胞团块，将混合液移入50ml聚丙乙烯管中，4℃沉降5min；
4．将细胞悬液移入另一50ml聚丙乙烯管， 200 × g 离心7min，弃上清；
5．用冰冷的0.17mol/L NH4Cl 水溶液（2-3ml/ 每个脾脏）悬起沉淀，在室温下培养5-10 min，以溶解红细胞，然后缓慢加入45ml培养基A；
6．200 × g 离心7min，弃上清；
7．沉淀再悬入10ml 培养基A中。
（二）骨髓瘤细胞的制备
1．在对数生长期收获107-108的骨髓瘤细胞；
2．200 × g 离心7min，弃上清；
3．轻轻震动试管以松动沉淀，将细胞悬于20ml 培养基A中；
4．200 × g 离心7min，弃上清；
5．细胞悬于10 ml 培养基A中，取适量进行细胞计数；
6．200 × g 离心7min，弃上清；
7．沉淀再悬于10 ml 培养基A中。
