3.实 验 用 品
3.1 器材
3.1.1 主要设备: 普通离心机、普通光学显微镜
3.1.2. 小型器材: 100ml量筒2个, 滴管10支, 10ml刻度离心管20支, 载、盖片各20片
3.2 材料 新鲜鸡血
3.3 试剂
3.3.1. Alsever液制备
葡萄糖(Glucose) 2.05g
枸椽酸钠 0.8g
氯化钠(NaCl) 0.42g
重蒸水 至100ml
3.3.2. 0.85%生理盐水液
3.3.3. GKN液
氯化钠 8g
氯化钾(KCl) 0.4g
Na2HPO4•2H2O 1.77g
NaH2PO4•H2O 0.69g
葡萄糖 2g
酚红(phenolred) 0.01g
溶于1000ml重蒸水中。
3.3.4. 50% PEG液 (现用现配)
根据实验需要,称取适量PEG(Mr.4000)放入刻度离心管内,在酒精灯上将其加热熔化,待冷却至50℃,加入等体积的已预热至50℃的GKN液并充分混匀。
4.实 验 方 法
将Alsever液与活鸡翼下鸡血混成1:4悬液 (抗凝效果最佳)
↓
4度冰箱保存
↓
取上述悬液加入生理盐水混匀
↓
1200r/min离心5分钟
↓弃上清
上述离心速率重复离心两次(5min, 10min)
(以达到去除细胞表面粘附物质的目的)
↓弃上清
加入适量GKN液,配成细胞悬液
↓
取悬液以血球计数法计数
↓
再用GKN液将红细胞的浓度稀释
↓
加入 50%的PEG液混匀
↓
吸取1~2滴镜检并计算出融合率
5.实 验 结 果
经PEG处理后,在显微镜下,可观察到未融合的单核细胞、融合后的双核细胞和融合后的多核细胞。
细胞的融合率指在显微镜的视野内,已发生融合的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核总数之比。可用如下公式表示:
在实验中统计融合率时, 要进行多个视野计数,然后再加以平均,以使计算更为准确。


