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大规模培养常用方法
作者:未知 来源:恒利安生物 时间:2005-11-17


    细胞凋亡由一系列基因精确地调控,是多细胞生物发育和维持稳态所必需的生理现象。已知凋亡的最终执行者是Caspase家族,它们均为半胱氨酸蛋白酶,各识别一个4氨基酸序列,并在识别序列C端天冬氨酸残基处将底物切断。Caspase含有可被自身识别的序列,可以切割活化自身而导致信号放大,并作用于下游Caspase成员,从而形成Caspase家族的级联放大,最终作用于效应蛋白,引起细胞凋亡。 

    所以在大规模培养时干扰细胞在培养中凋亡的发生,提高细胞特异性抵制遇到压力而引起凋亡的能力,有利于提高细胞的培养密度、延长细胞的培养周期,从而提高目标产品的产量2-3倍。 

    1.营养物质抗凋亡 
    在常规生物反应器构造中,营养耗竭或缺乏培养基中特殊的生长因子则引起凋亡,例如血清,糖或特殊氨基酸的耗尽。培养基中添加氨基酸或其它关键营养可抑制凋亡、延长培养时间从而提高产品的生产。大规模培养中细胞凋亡主要由于营养物质的耗竭或代谢产物的堆积引起,如谷氨酰胺的耗竭是最常见的凋亡原因,而且凋亡一旦发生,补加谷氨酰胺已不能逆转凋亡。另外,动物细胞在无血清、无蛋白培养基中进行培养时,细胞变得更为脆弱,更容易发生凋亡。 

    2.基因抗凋亡 
    与凋亡相关的一系列基因产物可对其进行正、负向的调控,因此可通过导入相应基因来调节细胞凋亡的机制。Bcl-2基因是目前最为有效的抗凋亡基因,在多种细胞系中均表现出很强的抗凋亡活性。 

    3.化学方法抗凋亡 
    凋亡发生时细胞许多部位发生生化物质的改变,有些变化如改变细胞氧化还原条件产生活性氧在凋亡信号阶段发生,其它的如破坏线粒体膜电位、激活caspase则发生在凋亡效应阶段,这在绝大多数细胞死亡中是相同的。因此,阻止这些生化物质的改变可能阻止或至少延迟细胞凋亡的发生,运用化学物质可抑制信号效应阶段的发生,被认为是抗调亡策略之一。

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