2.温度：离体培养细胞一般要参考该种动物的体温设计培养时所用温度。通常哺乳动物的体温在37－38.5°C，禽类略高些，温度在39°C－40°C。因此，离体哺乳动物细胞培养的温度最适为37－38.5°C。在较低温度环境中，对细胞影响不大，但细胞对较高温度却比较敏感。
3.密度：密度是指细胞接种浓度。在细胞培养中，接种的细胞数目对细胞的生长状况有很大的影响。适宜的细胞浓度可以促进细胞的增殖。接种的细胞浓度过大或过小，均对细胞的增殖不利。尤其是原代细胞，其接种量与培养时细胞增殖的关系最大。一般接种的细胞（如肾细胞）数目以30－70万/ml为宜。
4.器皿的清洗：细胞培养所使用的器皿必须干净，所以在细胞培养工作中，器械的清洗是十分重要的，也是起关键性作用的工作，它直接影响到细胞培养的成败。
（1）新玻璃器皿的清洗步骤：先用自来水或肥皂水刷洗干净，放入洗液中过夜或浸泡几天，取出用自来水冲洗8至10次。然后，用蒸馏水洗3次，用去离子水（或三蒸馏水）洗2－3次，烤干、包装、灭菌。
（2）橡皮制品的清洗步骤：一般选用白皮橡皮塞，使用前先用自来水洗涮干净，以后用2％NaOH煮20分钟，用自来水冲洗5－6次，再用1.3％HCl煮30分钟，用自来水冲洗5－6次，用蒸馏水洗3次，最后用去离子水洗，干后包装灭菌。
（三）细胞培养的有关名词及其概念
1.原代培养（primary culture）
直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。
2.传代培养（subculture）
细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。
3.悬浮培养（suspension culture）
细胞培养的一种类型。培养时通过一特殊的装置，使细胞瓶按一定的速度不断地转动，使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。
4.克隆（clone）
克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体（population）。
5.细胞系（cell line）
在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成。如果不断继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系（finite cell line），如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）。以前认为细胞系来自细胞发生了遗传突变，并带有癌变的特点，这种细胞有可能在培养条件下无限的传下去。这种细胞的特点是染色体为异倍体，丧失了正常细胞的“接触抑制”的特性。
6.细胞株（cell strain）
细胞株的概念如下：由原代培养中，用选择或克隆代，选出具有特征标记的细胞，经传代形成细胞株，这些特性或标记在以后的培养中必须保持下去。以前认为经体外传代培养后细胞不表现退化现象，大约可传50代以上者，其染色体维持二倍体不变，保留正常细胞的“接触抑制”等特性。

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