（2）细胞的生长阶段及形态特征
传代培养的细胞需逐日进行观察，注意细胞有无污染，培养液颜色的变化及细胞生长的情况。一般单层培养的细胞，从培养开始，经过生殖、繁殖、衰老及死亡的全过程。它是一个连续的生长过程，但为了观察及描述，人为地将其分为5个时期，但各期间无明显绝对界限。现分别描述如下：
A．游离期：当细胞经消化分散成单个细胞后，由于细胞原生质的收缩和表面张力以及细胞膜的弹性。所以，此时细胞多为圆形，折光率高，此期可延续数小时。
B．吸附期（贴壁）：由于细胞的附壁特性，细胞悬液静置培养一段时间（约7～8h）后，便附着在瓶壁上（此期不同细胞所需时间不同）。在显微镜下观察时可见瓶壁上有各种形态的细胞，如圆形、扁形、短菱形。细胞的特点，大多立体感强，细胞内颗粒少，透明。
C．繁殖期：培养12h以后直到72h（不太细胞亦不同），细胞进入繁殖期，加速了细胞生长和分裂。此期包括由几个细胞形成的细胞岛（即由少数细胞紧密聚集而呈现的孤立细胞群，常散在地分布瓶壁上），到细胞铺满整个瓶壁（即所谓形成细胞单层）的过程。此期细胞形态为多角形（呈现上皮样细胞的特征）。细胞特点：透明，颗粒较少，细胞间界限清楚，并可隐约见到细胞核。根据细胞所占瓶壁有效面积的百分率，又可将其生长状况分为四级。以“＋”的多少表示如下：
＋：细胞占瓶壁有效面积（也就是细胞能生长的瓶壁面积）的25％以内有新生细胞。一般要观察3－5个视野内的细胞生长状况，然后加以综合分析判断。
＋＋：细胞占瓶壁有效面积的25～75％以内具新生细胞。
＋＋＋：细胞占瓶壁有效面积的75～95％具新生细胞。细胞排列致密。但仍有空隙。
＋＋＋＋细胞占瓶壁95％以上，细胞已长满或接近长满单层，细胞致密，透明度好。
从＋＋→＋＋＋＋为细胞的对数增长期（或称为指数增长期），
D．维持期：当细胞形成良好单层后，细胞的生长与分裂都减缓，并逐渐停止生长，这种现象被称为细胞生长的接触抑制。此时细胞界限逐渐模糊，细胞内颗粒逐渐增多，且透明度降低，立体感较差。由于代谢产物的不断积累，维持液逐渐变酸。此时营养液已变为橙黄色或黄色。
E．衰退期：由于溶液中营养的减少和日龄的增长，以及代谢产物的累积等因素，此时细胞间可出现空隙、细胞中颗粒进一步增多，透明度更低，立体感很差。若将细胞经固定染色处理后，可见细胞中有大而多的脂肪滴及液泡。最后，细胞皱缩，逐渐死亡，从瓶壁上脱落下来。
四、思考
1.细胞传代培养的操作程序及注意事项。
2.细胞培养获得成功的关键要素是什么？
3.体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。
 
附录：细胞培养中的有关问题
（一）细胞的计数方法
细胞计数一般用血球计数板，按白血球计数法进行计数。

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