9.观察
     置于37℃培养的细胞，需逐日进行观察，主要观察：
      （1）培养物是否被污染，如培养液变为黄色且混浊，表示已经被污染。
      （2）细胞生长状况与培养液颜色的变化，如培养液变为紫红色，一般细胞生长不好。可能是瓶塞未盖紧或营养液pH过高。
      （3）培养液若变为桔红色，一般显示细胞生长良好。
        经过1～2天的培养后，若细胞生长情况较差或培养液变红了，则可换一次营养液。换液时也要注意无菌操作，在酒精灯旁，倒去原培养液，再加入等体积的新配营养液，pH7.0。若经2～3天后，细胞营养液变黄，此时表示细胞已生长。如果希望细胞长得更好些，此时也可换液，换液时，所用的营养液称为维持液，它与营养液的组成完全相同，仅所用血清为5％。以后，每隔3～4天（视细胞液pH值而定）更换一次维持液。待细胞已基本长成致密单层时，此时即可进行传代培养。
（二）传代细胞的传代
 在做传代细胞培养之前，首先将培养瓶置于显微镜下，观察培养瓶中细胞是否已长成致密单层，如已长成致密单层，即可进行细胞的传代培养。    
     各种传代细胞的传代方法基本相同，只是各种细胞所需的营养液成分有差别，现以HeLa传代细胞系为例介绍细胞传代的基本方法。
     1.首先配制营养液
             E－EM液                                   90％
             犊牛血清                                          10％
             双抗（1万单位/ml）                约100单位/ml
             3%谷氨酰氨                                 1ml
             7.4%NaHCO3                      调pH至7.0~7.2
    2.在酒精灯旁打开瓶塞，倒去瓶中的细胞营养液，然后加入适量的无钙，镁离子的PBS液，轻轻摇动，将溶液倒出。
    3.消化与分装
    在上述瓶中加入适量消化液（0.02%EDTA或0.04%EDTA+0.5%胰蛋白酶液各一半）以盖满细胞为宜，置于室温，停留2～3分钟，翻转培养瓶，肉眼观察细胞单层是否出现缝隙（针孔大小的空隙），如出现缝隙，即可倒去消化液，如未出现缝隙，则可将瓶翻回，继续进行消化，直到出现缝隙为止（消化时间的长短与不同的细胞及生长状态有关）。此时，可倒去消化液，加入新配置的营养液3ml，以中止消化。然后用吸管吸取培养瓶中的营养液，反复吹打瓶壁上的细胞层，直到瓶壁细胞全部脱落下来为止。此时，可继续轻轻吹打细胞悬液，以使细胞散开。随之即可补加营养液，细胞传代的比例，不同的细胞亦不同，HeLa细胞一般以1:2或1:4进行分装，即一瓶细胞可分装两瓶。若原瓶为5ml营养液，要分装成两瓶，则需补液到10ml，混匀，即可将另一半分装至另一瓶中。
    4. 培养
     分装好的细胞瓶上，做好标志，注明细胞代号、日期。置于细胞架上，轻轻摇动。以使细胞均匀分布，以免细胞堆积成团。然后置于37℃培养。
     5.观察
    （1）观察体外培养细胞的几个问题：
     细胞培养24小时后，即可进行观察，观察的重点如下
     A.首先要观察培养细胞是否污染。主要观察培养液颜色的变化及混浊度。
     B.观察培养液颜色变化及细胞是否生长。
     C.如细胞已生长，则要观察细胞的形态特征并判断其所处的生长阶段。观察时，可参照以下（2）的描述进行。
     D.观察完毕，可用台盘蓝染液对细胞进行染色。以确定死活细胞的比例。

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