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细胞培养常见问题及其解决方法[3]
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-11-17


    31.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定? 

    GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。
    GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。

    32.什么培养基中可以省去加酚红? 

    酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。

    33.如何用台盼兰计数活细胞? 

    用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升,在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色细胞是死细胞。

    34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么? 

    丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

    35.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么? 

    二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。

    36.室温下配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用时PH值是多少? 

    缓冲液PH值随温度变化而变化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃时,不同PH值。

    50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃时,不同PH值

    4°C

    25°C

    37°C

    8.1
    8.2
    8.3
    8.4
    8.5
    8.6
    8.7
    8.8
    8.9
    9.0
    9.1
    9.2
    9.3
    9.4

    8.5
    7.6
    7.7
    7.8
    7.9
    8.0
    8.1
    8.2
    8.3
    8.4
    8.5
    8.6
    8.7
    8.8

    7.2
    7.3
    7.4
    7.5
    7.6
    7.7
    7.8
    7.9
    8.0
    8.1
    8.2
    8.3
    8.4
    8.5
















     

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