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细胞培养常见问题及其解决方法[3]
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-11-17


    18.培养基中是否须添加抗生素? 

    除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何抗生素。
    19.应如何避免细胞污染? 

    细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。 

    20.如果细胞发生微生物污染时,应如何处理? 

    原则上:直接灭菌后丢弃之。 

    当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
    高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

    1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

    2.分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    3.每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

    4.确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。

    5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

    6.重复步骤4。

    7.在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。

    21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞, 是否能以肉眼观察出异状? 

    不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株, 无法以其外观分辨之。 

    22.支原体污染会对细胞培养有何影响? 

    支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数, 代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。

    23. 侦测出细胞株有支原体污染时, 该如何处理? 

    直接灭菌后丢弃,以避免污染其它细胞株。

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