原生质体分离纯化或融合后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团，长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体培养中最基础也是最关键的环节。
[实验内容] 1．原生质体分离 2．原生质体融合 3．原生质体及融合体的培养
材料用品：
三角瓶、离心管、烧杯、200目滤网、解剖刀、长、短镊子、培养皿、滤纸、0.2μm滤膜、滤器、培养瓶（注：以上用品要进行高压灭菌）、台式离心机、高压灭菌锅、倒置显微镜、超静工作台
实验步骤：
1．溶液及培养基的配制
| (1)酶液 | (2)PEG融合液 | (3)13％CPW洗液 |
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1％纤维素酶 1％果胶酶 0.7mol/L甘露醇 0.7mmol/LKH2PO4 10mmol/LCaCl2·2H2O pH6.8—7.0 |
40% PEG (MW 1500-6000) 0.3 mol/L葡萄糖 3.5mmol/L CaCl2·2H2O 0.7mm0l/L KH2PO4 |
27．2 mg／L KH2PO4 101.0 mg／L KNO3 1480．0 mg／L CaCl2·2H2O 246．0 mg／L MgSO4 0．16 mg／L KI 0．025 mg／L CuSO4 13％ W／V甘露醇 pH 6.0 |
(4)20％蔗糖溶液
(5)黄瓜种子萌发与生根培养基（固体）：1/2MS（注：MS无机成份减半，蔗糖0.2%,琼脂0.7%）
(6)黄瓜原生质体形成愈伤组织培养基(固体和液体)：MS+0.05mg/L NAA+1mg/L BA(MS成份见 )
(7)黄瓜原生质体愈伤组织分化培养基(固体)：MS+5mg/L NAA
(8) 无菌蒸馏水
(9) 0.1% HgCl2
注：以上（1）-（4）溶液均要用孔径0.2μm滤膜过滤以除去细菌。（5）-（8）培养基等要进行高压灭菌
