1.2 RNAi的特征 从RNAi的作用机制，可以看出RNAi具有以下显著特征[ 1, 2, 8 ]：⑴RNAi是dsRNA介导的PTGS机制。在此过程中，启动子是活跃的，基因可以进行正常转录，但不能正常积累mRNA, 从而使基因在转录后水平失活。⑵高特异性。RNAi只降解同源mRNA，而其他mRNA的表达则不受影响；siRNA除正义链3’端两个碱基在序列识别中不起重要作用外，其他单个碱基的改变，就有可能导致RNAi的失败。⑶高效性。siRNA能在低于反义核酸几个数量级的浓度下，显著抑制基因表达甚至完全敲除，从而产生缺失突变体表型，比基因敲除更快更简单，而且对于那些在胚胎中敲除后致死的基因，也可利用RNAi技术进行研究。此外， RNAi具有强大的细胞穿透力，可在细胞间传递和维持，在线虫中干扰效应甚至可以传递到后代中去。
1.3 RNAi技术的形成与发展 RNAi作用能够高特异和高效率地抑制生物体某一基因的表达，使其不能发挥作用，为应用反向遗传学研究基因功能提供了一种快速和简便的方法。随着RNAi原理在基因功能研究中的应用，RNAi技术便应运而生并得到了迅速发展。
RNAi作为反向遗传学研究的工具运用于不同的生物体时，通常所采取的具体方法也有所不同，这主要是因为dsRNA的导入所要求的技术条件不同引起的。早期的RNAi技术首先在线虫和果蝇等低等的动物中得到应用。dsRNA可通过直接注射入性腺、将虫体浸泡入含dsRNA的溶液以及喂哺携带可表达两条互补ssRNA或发卡状RNA（hairpin RNA, hp RNA）的质粒的细菌等3种方式导入线虫。通过对线虫直接注射dsRNA的方法，现已明确了许多基因的功能。将dsRNA直接注射果蝇胚胎的方法，已在与发育有关的基因功能研究得到了应用；应用载体表达反向重复发卡状结构的策略，可以在成年果蝇中实现稳定的基因沉默。但dsRNA诱导RNAi在哺乳动物体细胞的应用却受到阻碍，原因在于dsRNA可通过激活dsRNA依赖性蛋白激酶和干扰素途径，导致蛋白合成广泛抑制，以及诱导2’，5’-多聚腺嘌呤酸合成，激活非特异性的Rnase（Rnase L），从而产生对脊椎动物细胞基因表达的非特异性效应[ 9 ]。
小于30 个nt的dsRNA即siRNA，已被证明不会造成上述非特异性反应。许多研究者已将其应用于哺乳动物细胞，并成功地造成对基因表达的序列特异性抑制。所采用的siRNA长度一般为21~23 nt，由化学合成或T 7 RNA聚合酶体外转录的正义与反义RNA单链退火而获得，并具有2个nt 3’突出端。siRNA具有较高的稳定性，以3 ’端突出TT的siRNA尤为稳定，由脂质体介导转染细胞。siRNA介导RNAi的效能，取决于siRNA的有效性、转染效率、细胞类型以及目的蛋白更新速度等多种因素[ 2, 10,11 ]。
