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免疫细胞化学常用试剂介绍
作者:未知 来源:本站原创 时间:2005-7-9

     
      1.铬矾明胶液
      试剂:铬矾        0.5g
      明胶(Gelatine)     5g
      H2O           ~1000ml
      方法:在1000ml的烧杯或烧瓶中,以500~800ml H2O加温溶解明胶,待其完全溶解后,再加入铬矾。注意温度过高易使明胶烧糊,包被玻片时最好控制水温在70℃。如有明显残渣,过滤后使用。
      2.甲醛-明胶液
      试剂:40%甲醛      2.5ml
      明胶          0.5g
      蒸馏水         至100ml
      配制方法:用少许蒸馏水(约80ml)加热溶解明胶,待完全溶化后,加入甲醛,最后补充蒸馏水至100ml混匀即可。
      3.多聚赖氨酸(Poly-L-Lycine,PLL)
      试剂:多聚赖氧酸      5g
      蒸馏水           ~1000ml
      配制方法:称取PLL,溶于H2O,充分混合即可,此液浓度为0.5%,可适当稀释配成0.01~0.5%浓度。4℃保存,也可-20℃备用。PLL可反复冰冻,效果无明显影响,工作液常再稀释10~50倍。
      4.Vectabond试剂  该试剂是Vector公司新进推出的一种新型玻片粘附剂。该试剂与一般的粘附剂不同,它是通过对玻璃表面起化学修饰作用,改变其表面的化学物理特性,使组织切片牢固地贴于玻璃片上,贴上后不易脱落,保留时间较久。一个试剂盒(7ml)可配成350ml工作液(用丙酮配)。处理载玻片前(事先酸处理),用染色缸装好各种液体,按下列程序进行:
      干净载玻片→丙酮5min→Vectabond试剂工作液(7ml Vectabond+ 350ml丙酮):将载玻片用镊子夹住浸入Vectabond试剂1~2次→dH2O,2×5min→干燥(37℃过夜)→用铝箔包好,室温存放备用。
      注意:避免污染(尘埃等)。
      综上述方法处理的载片一般可存放半年以上。
      五、封固剂
      1.甘油-TBS及甘油-PBS
      
      配制方法:按比例将甘油和TBS(或PBS)充分混合后,置4℃,冰箱静止;待气泡排除后方可使用。
      2.甘油-明胶(冻)
      试剂:明胶     10g
      甘油        12ml
      蒸馏水       100ml
      香草酚       少许
      配制方法:称取1g明胶于温热(约40℃)的蒸馏水中,充分溶解后过滤,再加入12ml甘油混合均匀。少许香草酚是为了防腐。
      3.液体石蜡  液体石蜡因含杂质少,很少引起非特异性荧光,故常用于荧光组化及免疫荧光法时标本的封固。
      4.DPX
      试剂:Distrene    10g
      酸二丁        5ml
      二甲苯       35ml
      DPX为中性封固剂,用于多种染色方法匀不易褪色,但组织收缩较明显,故应尽量使其为均匀的一薄层。DPX现有商品出售,可直接应用。若感过于粘稠,也可加少量二甲苯稀释后应用。注意:二甲苯不可加得太多,二甲苯挥发后,片子上出现许多干燥的空泡,影响观察,遇有这种情况,可用二甲苯浸泡掉盖玻后重新封固。
      六、酶消化液
      1.0.1%胰蛋白酶
      试剂:胰蛋白酶      0.1gm
      0.1%氯化钙(pH7.8)   100ml
      配制方法:先配制0.1%的CaCl2,用0.1mol/L的NaOH将其pH调至7.8,然后加入蛋白酶溶解之。用前将胰蛋白酶消化液在水浴中予热至37℃(载有标本的玻片也在TBS中予热至同样样温度)。该消化液时间约为5~30min。
      2.0.4%胃蛋白酶
      试剂:胃蛋白酶      400mg
      0.1N HCl         100ml
      配制方法:同胰蛋白酶。消化时间在37℃约为30min。
      3.0.06% Pronase
      试剂:Pronase       0.06g
      0.05mol/L TB(pH7.5)    100ml
      配制方法:同前。
      在免疫细胞化学染色中,有时经Formalin过度固定的标本,常会产生过量的醛基,遮盖抗原,影响一抗与抗原的结合。用蛋白酶溶液消化,可起到暴露抗原部分的作用。消化时间应根据不同组织而异,总之,在保持组织形态不被破坏的前提下,宜尽量延长消化时间。以上三种酶消化液中,以第一种最为常用。
      七、其它
      1.蔗糖溶液  免疫细胞化学中应用的蔗精,常用浓度为5%~30%。一般光镜研究,仅用20%蔗糖处理已足矣,若制备电镜标本,在冰冻前最好经上行蔗糖(5%、10%、15%、20%及20%蔗糖-5%甘油等)处理,以确保其良好的细微结构。
      (1)20%蔗糖液:
      试剂:蔗糖           20g
      0.1mol/L PB(pH7.5)       至100ml
      配制方法:先以少许0.1mol/L的PB溶解蔗糖,再加0.1mol/l PB至100ml充分混合,置4℃冰箱保存。
      该液多用于纯光镜研究。标本在刚放入浓度如此高的蔗糖液,常浮在上面,当标本沉到底部时即可。通常光镜标本浸泡在20%蔗糖液中过夜。都能达到要求。
      (2)20%蔗糖-5%甘油:
      试剂:蔗糖       20g
      甘油          5ml
      0.1mol/L PB      至100ml(约95ml)
      配制方法:先用少许PB溶解蔗糖后,再加入甘油,充分混匀,最后补足PB至100ml,于4℃保存备用。
      该液主要用于电镜标本的处理,常浸泡过夜(其它浓度的蔗糖中常分别为2h左右)。
      蔗糖是一种廉价的防冻剂,兼有脱水的作用,它可减小标本在冰冻切片时冰晶形成的数量和大小,应用较

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