5.NBT显色液
试剂A液:5%NBT:称 取0.5gNBT溶于10ml 70%的DMF(二甲基甲胺)内,充分混合,常存于4℃,也可装成小份,-20℃保存,用前复温。
B液:5% BCIP:称取BCIp 0.5g溶于10ml 100%的DMF内,混匀。4℃或分装存于-20℃,用前恢复至室温。
C.显色液:取A液40μl,加入到盛有10ml的0.1mol/l Tris-HCl(pH9.5,钤0.1mol/L NaCl、5mmol/L MgCl2)管内,充分混匀;再加入B液40μl,轻轻混合即可。最好用前新鲜配制。
NBT即四唑氮蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium),MW=818,为深蓝色无定形微溶物质。BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate)。当二者存在时,在碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AP)作用下,NBT被还原形成显微镜下可见的蓝色或紫色沉淀。
四、粘附剂
在免疫细胞化学工作中,由于标本(如切片)的脱落常影响工作的质量的速度,故粘附剂的选择和使用就显得较为重要。


