2.0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(Phosphate Buffered Saline, PBS)
试剂:0.2mol/L PB 50ml
NaCl 8.5~9g(约0.15mol/L)
重蒸水 至1000ml
配制方法:称取NaCl 8.5~9g及0.2mol/L的PB 50ml,加入1000ml的容量瓶中,最后加重蒸水至1000ml,充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS,则PB量加倍即可,依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液,0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等,其pH应在7.25~7.35之间,否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下,0.2mol/l PB的pH值稍高些,稀释成0.01mol/L的PBS时,常可达到要求的pH值,若需调整pH,通常也是调PB的pH。
3.Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液
试剂: NaH2PO4·H2O 3.31g
Na2HPO4·7H2O 33.77g
重蒸水 至1000ml
配制方法:同前
该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4.0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g
1N HCl 约420ml
重蒸水 至1000ml
配制方法:先以少量重蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6,最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液,于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L,用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水(TBS)、DAB显色液。
5.Tris缓冲生理盐水(Tris Buffered,Saline,TBS)
试剂:0.5mol/L Tris-HCl缓冲液 100ml
NaCl 3.5~9g(0.15mol/L)
重蒸水 至1000ml
配制:先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液,最后加重蒸水至1000ml,充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。
TBS主要用于漂洗标本,常用于免疫酶技术中。
6.Tris-TBS(PBS)
试剂:Triton X-100 10ml(1%)或3ml(0.3%)
0.5mol/L Tris缓冲液(pH7.6) 1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)
NaCl 8.5~9g
重蒸水 至1000ml
配制方法:先以重蒸水少许溶解NaCl后,加入Triton X-100及Tris缓冲液或(PB),最后加重蒸水至1000ml,充分摇匀。
该液常用浓度为1%及0.3%,前者主要用于漂洗标本,后者主要用于稀释血清。
7.0.1mol/L(pH7.4)二甲胂酸缓冲液
试剂:0.2mol/L二甲胂酸钠 500ml
0.1N HCl 28ml
蒸馏水 至1000ml
配制方法:先称取二甲胂酸钠(MW:214)42.8g,加蒸馏水至1000ml,使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液;再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ,配成0.1N,最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合,加蒸馏水至1000ml,即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。
8.几种常用的不同pH值缓冲液的配制表
(1)0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.7~8.0)
pH0.2mol/L NaH2PO4(ml)0.2mol/L Na2HPO4(ml)
5.793.56.5
5.892.08.0
5.990.010.0
6.087.712.3
6.185.015.0
6.281.518.5
6.377.522.5
6.473.526.5
6.568.531.5
6.662.537.5
6.756.543.5
6.851.049.0
6.945.055.0
7.039.061.0
7.133.067.0
7.228.072.0
7.323.067.0
7.419.081.0
7.516.084.0
7.613.087.0
7.710.589.5
7.88.591.5
7.97.093.0
8.05.394.7


