小鼠腹腔巨噬细胞的制备
　　　　　小鼠采用与免疫小鼠相同的品系，常用BaLb／c小鼠6～10周龄
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　　　　　拉颈处死　浸泡于75％酒精，消毒3～5分钟
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　　　　　用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜
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　　　　　用无菌注射器注入6～8ml培养液
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　　　　　反复冲洗，吸出冲洗液
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　　　　　放入10ml离心管，1200转／分离心5～6分钟
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　　　　　用20％小牛血清(NCS)或胎牛血清(FCS)的培养液混悬，调整细胞数1×10５／ml
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　　　　　加入96孔板，100μl／孔
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　　　　　放入37℃　CO2孵箱培养
　　一般饲养细胞在融合前一天制备，一只小鼠可获得5～8×106腹腔巨噬细胞，若用小鼠胸腺细胞作为饲养细胞时，细胞浓度为5×106／ml，小鼠脾细胞为1×106／ml，小鼠的成纤维细胞(3T3)1×105／ml，均为100μl／孔。
　　(三)　骨髓瘤细胞
　　骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量　McAb。
　　常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653等。
　　骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10～20％，细胞的最大密度不得超10６／ml，一般扩大培养以1∶10稀释传代，每3～5天传代一次。细胞的倍增时间为16～20小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长，只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。
　　一般在准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HAT的敏感性，每3～6月应用8～AG(8氮杂鸟嘌呤)筛选一次，以防止细胞的突变。
　　保证骨髓瘤细胞处于对数生长期，良好的形态，活细胞计数高于95％，也是决定细胞融合的关键。
　　(四)　免疫脾细胞
　　免疫脾细胞指的是处于免疫状态脾脏中B淋巴母细胞棗浆母细胞。一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，由于此时B淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。
　　脾细胞悬液的制备：在无菌条件下取出脾脏，用不完全的培养液洗一次，置平皿中不锈钢筛网上，用注射器针芯研磨成细胞悬液后计数。一般免疫后脾脏体积约是正常鼠脾脏体积的２倍，细胞数为２×10８左右。
　　二、细胞融合，选择杂交瘤
　　(一)　细胞融合流程
　　(1)　取对数生长的骨髓瘤细胞SP2／0，1000rpm离心5分钟，弃上清，用不完全培养液混悬细胞后计数，取所需的细胞数，用不完全培养液洗涤2次。
　　(2)　同时制备免疫脾细胞悬液，用不完全培养液洗涤2次。
　　(3)　将骨髓瘤细胞与脾细胞按1∶10或1∶5的比例混合在一起，在50ml塑料离心管内用不完全培养液洗1次，1200rpm,8分钟。
　　(4)　弃上清，用滴管吸净残留液体，以免影响PEG的浓度。
　　(5)　轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略加松动。

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