2.　标记步骤:

　　(1)　称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。

　　(2)　于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO₄溶液，室温下避光搅拌20分钟。

　　(3)　将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

　　(4)　加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg IgG(抗体，或SPA5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。

　　(5)　加0.1ml新配的4mg／ml NaBH４液，混匀，再置4℃2小时。

　　(6)　将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。

　　其余步骤(纯化)同戊二醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。

　　3.　结果判定：

　　除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。

　　IgG量(mg／ml)＝(OD₂₈₀nm-OD₄₀₃nm×0.3)×0.62

　　4.　试剂及器材:

　　(1)　0.1M NaIO_４：称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。

　　(2)　1mM PH4.4醋酸钠缓冲液:

　　0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml

　　0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

　　加蒸馏水至2,000ml。

　　(3)　0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:

　　　　　　　Na₂CO₃ 0.32克

　　　　　　　NaHCO₃ 0.586克

　　　　　　　加蒸馏水至50ml

　　再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

　　(4)　NaBH_４溶液(4mg／ml):

　　临用时称取NaBH４4mg溶于1ml蒸馏水中。

　　(5)　其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。

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