端粒酶与肿瘤
人体内除了生殖细胞和少数一些体细胞如淋巴细胞等细胞外,绝大多数体细胞中无法检测到端粒酶的活性,而在多数肿瘤细胞中能检测到端粒酶的活性.
肿瘤的端粒长度很短,其继续缩短导致染色体融合,细胞死亡,而端粒酶的激活可以维持端粒的长度,维持肿瘤的继续分裂,增殖.
端粒酶的表达可能是肿瘤形成和发展的共同途径.
端粒酶与恶性肿瘤之间有相关性使之在肿瘤的诊断和治疗上有望成为新的靶目标.
可以通过各种途径抑制端粒酶的活性有效抑制大多数肿瘤的生长,而对正常细胞没有影响.
逆转录(reverse transcription)
逆转录酶 (reverse transcription)
逆转录病毒的基因组复制过程
乙肝病毒基因组的复制
逆转录酶 (reverse transcription)
1964年,Temin发现Rous肉瘤病毒等RNA病毒所造成的感染可被DNA合成抑制剂遏制.
表明:RNA肿瘤病毒的RNA复制过程中要合成DNA.
Temin又发现放线菌素D能抑制致癌RNA病毒的复制,但不能抑制一般RNA病毒的复制.
表明:转录对于RNA病毒增殖是必需的.
Temin提出前病毒假说:原病毒DNA是RNA肿瘤病毒在复制和致癌中的中间物.
1970年,Temin 在Rouse肉瘤病毒,Baltimore在白血病病毒中发现逆转录酶.
多功能酶:
1,RNA指导的DNA聚合酶活性
2,RNA酶H(RNaseH)活性:水解RNA-DNA杂交体上的RNA
3,DNA指导的DNA聚合酶活性:合成互补DNA.
4,没有3`→5`外切酶活性.
特点:
含有Zn2+
DNA合成反应要求有模板和引物.
需适当浓度的二价阳离子(Mg2+,Mn2+)
5' →3'
→
逆转录病毒的基因
组复制过程
第一阶段:合成负股cDNA的大部分
第二阶段:以负股DNA为模板合成一小部分正股DNA链.
第三阶段:完成cDNA的全部复制.
乙肝病毒基因组的复制
其复制需通过逆转录过程经RNA中间体实现 ,其DNA聚合酶也是一种逆转录酶.
逆转录病毒:RNA → DNA → RNA
乙肝病毒:DNA→RNA → DNA
试管内cDNA的合成
常用于获得或研究真核生物基因的方法.提取某一种特定的mRNA,经逆转录生成的cDNA可代表某一特定基因.
常用的逆转录酶有两种:来自鸟类成髓细胞瘤逆转录病毒称为AMV-RT;来自鼠白血病毒称为MMLV-RT.
病毒RNA复制的主要方式
1,病毒含有正链RNA,如灰质炎病毒.RNA(+) →蛋白质(酶)→ RNA复制
2,病毒含有负链RNA和复制酶如狂犬病毒.RNA(—) → RNA(+) →蛋白质,复制病毒RNA.
3,病毒含有双链RNA和复制酶.如呼肠孤.双链RNA → RNA(+) →蛋白质→ RNA(—) →双链RNA
4,逆转录病毒.
讨论题
如何知道DNA复制中先要有RNA引物的合成
原料
新合成DNA序列分析
专一核酸酶水解
某种病毒DNA的碱基组成(摩尔百分比)如下:
A=32;G=16;T=40;C=12
该病毒DNA的特点如何
简要说明怎样进行构建cDNA文库
组织培养的哺乳动物细胞S期长达5 小时,经放射自显影测定DNA复制的速度是0.5微米/分,已知哺乳动物细胞DNA全长1.2米,计算染色体复制时共有多少复制叉在复制
8×103
已知抹香鲸和猪的胰岛素具有相同的氨基酸序列,然而某些抗血清却能将它们区别开来,这岂不与"蛋白质的一级结构决定其高级结构"的理论相矛盾吗 你如何解释
将某种纯蛋白1mg进行氨基酸分析,得19.5ug的异亮氨酸(分子量=131.2),那么该蛋白质的最小分子量是多少
质粒DNA的提取与纯化
1,细菌的培养
2,细菌的收集与裂解
3,质粒DNA的纯化:
碱裂解法
原理:在pH12.0~12.6的碱性环境中,线性的大分子量细菌染色体变性,而共价闭环的质粒DNA仍为自然状态
