| 三、PCR |
 在进行PCR时： *请确保您没有使用过量的起始DNA或者过高浓度的引物，也没有加入过量的Mg++ *请确保您使用了恰当的退火温度 *请确保您没有使用过量的DNA聚合酶 |
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| 四、引物 |
| 1. 应该选择哪种纯化方法？ |
| 取决于实验目的和引物的长度 |
| 2. 为什么我订购了50nmol，但是收到却只有40nmol？ |
| 50nmol是起始量 |
| 3. 怎样制备100μM的储液？ |
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体积（μl）=质检报告上的nmol数目×10 |
| 4. 怎样设计引物？ |
| *一般长度20-30bp； *至少50%的GC含量； *避免引物二聚体和二级结构； *引物对的Tm值应该接近。 |
| 5. 引物序列有插入或缺失？ |
| *使用上游和下游引物多测几个克隆。 *请选择正确的纯化方法。 |
| 6. PCR无结果？ |
| *请检查引物设计是否正确； *请检测OD读数是否正确； *做一个阳性对照和一个阴性对照 |
