一、实验目的:
1、学习凝胶柱层析技术的原理及操作方法;
2、学习血红蛋白的制备方法。
二、实验原理:
1.凝胶层析:原理与应用
2.本实验反应原理:血红蛋白(hemoglobin,Hb)是红细胞的主要内含物,它是血红素和珠蛋白肽链联接而成的一种结合蛋白,属色素蛋白。血红蛋白(Mw=64 500)中加入过量的高铁氰化钾(K3Fe(CN)6,Mw=327.25),血红蛋白与高铁氰化钾反应生成高铁血红蛋白(MetHb)。为了除去多余的高铁氰化钾,得到较纯的MetHb样品,将上述混合物通过交联葡聚糖凝胶柱,用磷酸缓冲液洗脱,从颜色的不同,可直接观察到MetHb(红褐色)洗脱较快,而小分子高铁氰化钾(黄色)洗脱较慢,达到将MetHb完全分离出来的目的。




